小熊猫源犬瘟热病毒株 H 、 F 基因的克隆及序列分析

为了解1株圈养小熊猫源犬瘟热病毒（CDV）GD-1的遗传变异情况，通过RT-PCR方法对该株CDV进行H、F基因的克隆、测序及序列分析。结果显示：该分离株的H基因序列与GenBank中丹麦报道的登录号为GU266280的犬源CDV毒株的核苷酸序列相似性最高，为96%；F基因序列与巴西报道的登录号为KY057355的犬源CDV的核苷酸序列相似性最高，为95.7%。下载CDV代表毒株序列进行遗传演化、氨基酸序列比对及分子特征分析。结果显示：H蛋白共有8个潜在的N-糖基化位点，分别位于19、149、309、391、422、456、587、603位点；H蛋白的SLAM受体结合位点氨基酸序列与欧亚野生型毒株一致，与疫苗株相比，530、549位氨基酸不同，与其他CDV参考毒株H蛋白相比还存在24、41等9处氨基酸位点发生明显变异，与标准强毒株A75/17的氨基酸相似性为95.2%，与Onderstepoort、Convac等5株疫苗株的氨基酸序列相似性为88.2%~89.3%；F蛋白共有6个N-糖基化位点，分别位于62、108、141、173、179、517位，与Onderstepoort等疫苗株氨基酸相似性为89.1%~89.7%；与其他参考毒株相比还存在115、130等11处氨基酸发生变异；构建基于H、F基因的遗传进化树，结果显示：该毒株位于Asia-4型的一个小的进化分支，这与目前我国流行毒株主要位于Asia-1型存在明显不同。本研究首次报道了小熊猫源的Asia-4基因型CDV野毒株，并对毒株的H及F基因进行了序列分析，对于了解我国CDV流行株的遗传变异情况、流行病学调查、疾病防控及疫苗研发等具有重要意义。