牛抗菌肽Bac7-Bac5-β defense串联基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及其产物的活性分析

根据GonBank中公布的牛抗菌肽bac7、bac5和Bdefense（LAP基因）成熟肽基因序列，人工合成了抗菌肽融合基因Bac7-Bac5-β defense，克隆到BAC-TO-BAC^TM重组杆状病毒表达系统的pFAST HTb载体中，构建了重组转座载体pFASTBae-BacT-BacS-β defense，转化DH10Bac大肠杆菌（Escherichia coil）感受态细胞，PCR方法筛选阳性菌落，抽提大分子质粒DNA，获得重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-Bac7-Bac5-β defense，转染昆虫草地夜蛾（Bombyx mandadna）Sf9细胞出现病变后，收集含有重组病毒颗粒的培养上清，重新感染草地夜蛾St9单层细胞，收集Sf9细胞超声破碎，12％SDS=聚丙烯酰胺凝胶电泳可见表达的融合蛋白带，分子量大小为20kD，表达量约占细胞总蛋白的10．6％。体外抑菌实验表明重组的rBac7-Bac5-βdefense蛋白对大肠杆菌，具有抑菌活性。