应用载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞H—ras^Val12的表达

目的观察载体介导的RNA干扰（RNAi）技术对肝癌细胞突变的H—ras““。表达的抑制作用。方法将针对突变H—ras的短发夹RNA（shRNA）质粒表达载体转染肝癌细胞株BEL7402和SMMC7721，用免疫印迹（Westernblot）法检测H—ras蛋白的表达，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。计量资料比较采用t检验；计数资料比较采用，检验。结果（1）转染前、后SMMC7721的H—ras蛋白表达量[光密度值分别（17524-21）和（1736±28）]比较，差异无统计学意义（t=0．474，P=0．646）；而转染了Hl—sbRNA的BELT402的H—ras蛋白表达量（9204-11）与转染前（1221±11）比较，差异有统计学意义（t=20．126，P〈0．01）；转染了H2一shRNA的BEL7402的H—ras蛋白表达量（872±10）与转染前（1201±10）比较，差异有统计学意义（t=23．477，P〈0．01）。H1一shRNA组和H2一shRNA组H—ras蛋白表达下调了62．8％和63．4％。（2）流式细胞仪检测表明，BEL7402转染H1一shRNA质粒后细胞凋亡率（47．7％）与转染H2一RNA质粒后细胞凋亡率（49．3％）比较，差异无统计学意义（z。=0．005，P=0．94）；但均高于BELT402转染对照质粒后细胞凋亡率（30．2％），差异有统计学意义（疋2。。=6．810，P〈0．01；Y2。：：6．103，P〈0．01）。结论载体介导的RNAi技术可有效特异抑制肝癌细胞突变的H—ras“”表达，对野生型的H—ras表达无影响。