Contribution à l'étude des systèmes de restriction modification EcoR I et EcoR V

Les genes codant pour le systeme de restriction modification EcoR I ont ete clones separement dans les plasmides vecteurs pBR322 et pACYC184. L'etude de mutants spontanes de l'endonuclease EcoR I mec en evidence le caractere letal eu gene de l'endonuclease. De plus ce gene apparait etre un site preferentiel d'integration pour l'element d'insertion IS1. Un plasmide codant pour le systeme de restriction modification EcoR V a ete isole et caracterise. Ce plasmide, pLB1, a une taille de 6,2 Kb et porte comme seuls marqueurs identifiables le systeme EcoR V. Les deux genes codant pour l'endonuclease et la methylase ont ete localises sur un fragment 3 Kb sous-clone dans pBR322. Les positions relatives de ces deux genes ont ete determinees par construction d'une serie de deletions chevauchantes. La sequence nucleotidique du segment de 2,2 Kb contenant toute l'information genetique necessaire a l'expression du systeme a ete determinee. Les deux genes sont transcrits en direction opposee a partir d'une region intergenique de 310 pdb. L'identification des regions codantes a ete confirmee par la sequence des proteines. La structure secondaire potentielle de l’ARN messager permet de proposer un modele de modulation de la traduction du gene de l'endonuclease. D'autre part nous avons construit des clones surproduisant l'endonuclease et la methylase en placant cep deux genes sous le controle du promoteur PL de lambda.