大黄鱼冷诱导结合蛋白(CIRP)基因cDNA克隆及低温胁迫对其时空表达的影响

为研究冷诱导结合蛋白(CIRP)在大黄鱼低温适应过程中的作用，采用同源克隆技术获得了大黄鱼 CIRP 基因，并通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术检测了低温胁迫下大黄鱼各组织中 CIRP 基因的表达变化。结果显示，大黄鱼 CIRP 基因cDNA序列全长1211 bp，推测编码一个由182个氨基酸组成、分子量为19 ku的蛋白。序列比对显示硬骨鱼类 CIRP 基因序列较为保守，特别是N端的RNA识别基序(RRM)高度保守。系统进化树分析显示大黄鱼 CIRP 与银鳕相似性最高(81.5%)，所有硬骨鱼类聚为一个大支。慢性低温胁迫中(12 °C缓降至6 °C)，皮肤和肌肉中 CIRP 基因的表达量呈随温度降低而升高的趋势，6 °C时表达量分别为12 °C时的11.56倍和9.03倍；鳃、脑和心脏中 CIRP 基因表达量均呈先显著上升后显著下降的趋势，其峰值均出现在8 °C时，表达量分别为12 °C时的5.07、7.69和2.83倍；肠、肾脏、肝脏和脾脏中的表达量随温度降低而下降，6 °C时的表达量最低，与12 °C时相比降幅分别为80.0%、65.6%、91.2%、55.6%。急性低温胁迫(由12 °C骤降至8 °C并胁迫4 h)条件下，鳃、皮肤、脑、肝脏、心脏中 CIRP 基因表达量均呈先升高后降低的变化，反映了机体对低温胁迫的应激、适应过程；肌肉和肠中的表达量则始终显著低于胁迫前。慢性和急性低温胁迫中各组织 CIRP 表达量变化的差异提示，大黄鱼机体在低温胁迫响应和适应中有着多种调节机制。研究表明， CIRP 基因参与了大黄鱼应对低温胁迫的过程。