凡纳滨对虾 ARMC 8基因的克隆及表达

为了研究含Armadillo重复蛋白8在凡纳滨对虾抗病感染过程中所起的免疫作用，本实验采用RACE-PCR技术首次克隆得到凡纳滨对虾 ARMC 8基因（ LvARMC 8，GenBank注册号：KX058562）的cDNA序列全长，并利用在线软件进行生物信息学分析；采用实时荧光定量PCR（Rt-PCR）技术对 LvARMC 8基因在凡纳滨对虾不同组织及感染白斑综合征病毒和副溶血弧菌过程中的表达变化特征进行分析。结果显示， LvARMC 8基因全长为2917 bp，其中开放阅读框长2046 bp，编码681个氨基酸，5'非编码区长49 bp，3'非编码区长822 bp。预测分析显示 LvARMC 8编码的蛋白质含有6个ARM结构域。同源性分析发现， LvARMC 8基因与内华达古白蚁 ARMC 8基因的相似度最高，为71%。系统进化分析结果显示， LvARMC 8和多种无脊椎动物 ARMC 8聚为一支，其中与昆虫类动物赤拟谷盗、致倦库蚊和柑橘凤蝶的亲缘关系最近。Rt-PCR分析发现， LvARMC 8基因在凡纳滨对虾多个组织中均能检测出，在表皮中表达量最高，眼柄中表达量最低。WSSV感染后12 h， LvARMC 8基因在凡纳滨对虾血液中的表达量显著降低，但48 h后显著升高，72 h达到最高水平。除副溶血弧菌感染后24 h外的时间点， LvARMC 8基因在凡纳滨对虾血液中的表达量均显著升高。研究表明， LvARMC 8基因可能参与凡纳滨对虾抗病免疫应答途径。