指状青霉 cyt b 5 和 cyt b 5 r 基因克隆及与 cyp51A 的共表达

为探究指状青霉细胞色素b 5 （Cyt b 5 ）与细胞色素b 5 还原酶（Cyt b 5 r）在细胞色素P450 CYP51A电子传递方面的功用，研究了指状青霉CYP51A与Cyt b 5 -Cyt b 5 r共表达机制；并检测了其对于 cyp51A 基因表达水平的影响。通过转录组分析筛选并PCR克隆获得了c yt b 5与 cyt b 5 r 基因，分别命名为HS- Pdcyt b 5和HS- Pdcyt b 5 r 。以多基因串联克隆载体pPICZαA为骨架构建了指状青霉共表达质粒ppbrA（pPIC- Pdcyp51A - cyt b 5- cyt b 5 r ）；电转化法将重组质粒ppbrA导入毕赤酵母X-33中。qRT-PCR分析结果显示，CYP51A与Cyt b 5 -Cyt b 5 r共表达后，其基因表达水平升高5 4 % -9 7%，并维持较长时间（4 8-7 2 h）。表明Cyt b 5 -Cyt b 5 r系统可将电子高效转移给CYP51A，从而增强 cyp51A 基因的转录表达。从指状青霉中克隆表达HS-PdCyt b 5 和HS-PdCyt b 5 r蛋白，并通过共表达的方式研究 cyp51A 基因的功能尚为首次报道。