DETECÇÃO DE DNA DE Mycobacterium tuberculosis POR PCR EM TEMPO REAL

A tuberculose e uma doenca contagiosa que  se desenvolve em decorrencia de uma infeccao por Mycobacterium tuberculosis ou Bacilo de Koch (BK). Segundo o boletim epidemiologico do Ministerio da Saude de 2017, foram registrados 66.796 casos novos de tuberculose e 12.809 casos de retratamento da doenca no ano de 2016. O diagnostico laboratorial da tuberculose e baseado na baciloscopia e na cultura do bacilo (padrao ouro). A baciloscopia, apesar de ser simples e ter o resultado rapido, possui uma sensibilidade moderada, sendo necessario 10 mil bacilos/ml de expectoracao para que o resultado seja considerado positivo. A cultura, apesar de mais sensivel, e muito demorada (ate 60 dias). Os atrasos no diagnostico da tuberculose, propiciam a transmissao do bacilo na populacao e influenciam o prognostico dos individuos adoecidos, podendo levar a ocorrencia de resistencia a drogas e a morte. As tecnicas que utilizam a amplificacao de DNA por reacao em cadeia de polimerase (PCR) sao descritas como as mais sensiveis para o diagnostico de tuberculose. O estudo teve como objetivo detectar DNA de M. tuberculosis por PCR em tempo real diretamente de amostras clinicas de escarro . Foram utilizadas 30 amostras clinicas de escarro. Vinte delas, de pacientes com diagnostico de TB confirmados por baciloscopia e cultura (10 positivas e 10 negativas). Dez amostras negativas utilizadas para padronizar a tecnica, foram contaminadas com a cepa de referencia de Mycobacterium bovis . Todas as amostras tiveram o DNA extraido pela mesma tecnica e amplificados por PCR em tempo real atraves da deteccao da sequencia de insercao IS6110 marcadas (fluoroforo) SYBR ® Green. Para definir a sensibilidade analitica do teste, foi realizado o PCR com diluicoes seriadas de 1:10. O teste detectou o DNA de M. tuberculosis ate o limite de deteccao de 14 UFC com uma media de CT de 27 ciclos.  A curva padrao obteve uma eficiencia de 96,15%. Todas as amostras positivas foram amplificadas e todas as 10 negativas nao tiveram amplificacao. Assim, a tecnica mostrou ser promissora para uso na rotina laboratorial.