Allotransplantation in utero et immortalisation d'hépatocytes foetaux de primates

Nous developpons des approches precliniques chez le primate comme modele de therapie cellulaire pour le traitement de maladies metaboliques hepatiques. Chez le foetus, les tissus, dont le foie, sont en expansion, ce qui devrait faciliter la prise de greffe des hepatocytes, et le systeme immunitaire devient pleinement mature seulement apres la naissance. Nous avons defini les conditions d'isolement d'hepatocytes foetaux de macaques a la fin du 2 eme trimestre de gestation (90-100 jours), ainsi que les conditions de culture, de cryopreservation et de transduction retrovirale. Nous avons egalement evalue deux voies d'administration differentes des hepatocytes : la veine ombilicale, qui s'est revelee deletere pour les foetus, et l'injection intraparenchymateuse qui a ete parfaitement toleree par les animaux. Cette derniere a permis de mettre en evidence la presence d'hepatocytes allogeniques, c'est-a-dire un microchimerisme 9 jours apres transplantation. Nous avons egalement immortalise des hepatocytes simiens foetaux en utilisant un vecteur retroviral exprimant grand T de SV40 flanque de sites lox P. Une lignee cellulaire est maintenant etablie depuis 2 ans : elle n'est pas tumorigene apres injection sous-cutanee a des souris nude et expriment des marqueurs caracteristiques d'hepatoblastes bipotents, precurseurs des hepatocytes et des cellules des voies biliaires. Apres transplantation orthotopique via la veine porte chez des souris nude, ces cellules exprimaient l'albumine jusqu'au moment du sacrifice des animaux (17 jours). Les prochaines etapes seront la mise au point des conditions de transplantation d'hepatocytes transduits primaires et/ou immortalises chez des foetus plus jeunes (60 jours de gestation) et chez le macaque nouveau-ne.