枯草芽孢杆菌 SCK6 超级感受态的制备和转化条件优化

枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性好氧细菌，因其安全性和高分泌特性，已被广泛用作异源蛋白的表达宿主。然而，相比大肠杆菌，枯草芽孢杆菌的转化效率低，限制了其作为宿主的异源蛋白的定向进化。本文通过改变培养基、诱导剂浓度、质粒类型等参数优化感受态制备的条件，利用常规质粒进行转化，结果表明，用营养丰富的YN培养基替代常规LB培养基制备感受态，可以使转化效率提高4倍左右；加入1.5%的木糖诱导2 h，感受态的转化效率又提高2倍左右；用大肠杆菌 Escherichia coli GM272来源的质粒又可进一步提高转化效率3倍左右。综合最优条件制备SCK6的感受态，转化整合型质粒pDG1730，效率可以达到10 6 CFU/µg，相对未优化的条件提高了2个数量级，为基于枯草芽孢杆菌的酶的定向进化和代谢工程奠定了基础。