基于Tet-On Advanced的肺癌细胞15-脂氧化酶-2基因表达载体的构建与表达

目的：构建肺癌细胞15-脂氧化酶-2（15-Lox-2）的可诱导性真核表达载体pTRE-Tight-15-Lox-2，并在肺癌细胞中检测其是否可受强力霉素（DOX）诱导表达。方法：pcDNA3-15-LOX-2载体经＆0RI和XbaI双酶切线性化，回收15-LOX-2cDNA片段，将其克隆入pTRE-Tight载体的EcoRI和XbaI位点；采用脂质体法将pTet-0n-Ad-vanced与构建的pTRE-Tight-15-Lox-2共转染肺腺癌A549细胞，DOX诱导表达后，Western印迹检测15-Lox-2的表达水平。结果：构建了pTRE-Tight-15-Lox-2诱导表达载体；Western印迹检测表明，该载体能在肺癌细胞内表达，且其表达受DOX调控。结论：Tet-OnAdvanced系统能严密高效地调控15-LOX-2在肺癌细胞中的表达，为进一步研究15-LOX-2在肺癌中的作用奠定了基础。