ЭФФЕКТИВНЫЙ И СПЕЦИФИЧНЫЙ КОНТРОЛЬ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА AML1/ETO В КЛЕТКАХ ОСТРОГО МИЕЛОИДНОГО ЛЕЙКОЗА С ПОМОЩЬЮ РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ, ОСНОВАННОЙ НА ЛЕНТИВИРУСНОЙ ТРАНСДУКЦИИ

Нами предложен и успешно апробирован метод контроля экспрессии гибридного гена aml1/eto в клетках острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), содержащих транслокацию t(8;21)(q22;q22). Разработанный подход основан на использовании методологии РНК-интерференции (РНКи) и лентивирусной трансдукции. Сконструировано и испытано два набора лентивирусных векторов доставки для запуска конститутивной анти-aml1/eto РНК-интерференции в лейкозных клетках с помощью (1) искусственных микроРНК (miРНК) и (2) коротких шпилечных РНК (shРНК). Показано, что проведение трансдукции с использованием любого из этих наборов позволяет эффективно модифицировать лейкозные клетки линий Kasumi-1 и SKNO-1; при этом процент модифицированных клеток можно легко контролировать, манипулируя таким показателем как множественность инфекции (MOI). Так, при MOI 40 для клеток линии Kasumi-1 и MOI 20 для линии SKNO-1 содержание модифицированных клеток превышает 90%. При сравнительном анализе уровня нокдауна гена aml1/eto с помощью конститутивной РНК-интерференции показано, что эффективность подавления экспрессии целевого гена в клетках Kasumi-1 и SKNO-1 выше при использовании вектора, несущего анти-aml1/eto shРНК. Мы надеемся, что предлагаемый нами подход для контроля экспрессии гена aml1/eto будет востребован при изучении функциональной значимости этого гена как в системах in vitro, так и in vivo.