Reinigung von monoklonalen Antikörpern

Eine Reinigung von monoklonalen Antikorper (mAk) aus Aszitesflussigkeit und Zellkulturuberstand ist fur die meisten Anwendungen notwendig. Auf die moglichen Folgen der Verwendung unzureichend gereinigter monoklonaler Antikorper soll mit Hilfe einiger Beispiele hingewiesen werden: a) In den Tumoraszites gelangtes Immunglobulin aus dem Serum der aszitestragenden Maus kann eine Reaktivitat des mAk mit einem Antigen vortauschen, gegen das die Maus zuvor auf naturliche Weise immunisiert worden ist. Praktisch ist das vor allem dann von Bedeutung, wenn der mAk in der Aszitesflussigkeit in geringer Konzentration vorliegt oder nur eine geringe Affinitat zu seinem Antigen aufweist und deshalb nicht in hohen Verdunnungen eingesetzt werden kann. Eine Serumprobe der Maus, die vor der Injektion der Hybridomzellen gewonnen wurde, kann in solche Fallen als Kontolle verwendet werden. b) Bei der direkten Markierung (z.B. mit Biotin, Peroxidase oder einem Fluorochrom) einer nicht ausreichend reinen Praparation eines mAk konnen weitere Proteine (z.B. Insulin oder Transferrin u.a.) zusatzlich markiert werden. Wird der Antikorper nun eingesetzt, um z.B. Zellen auf die Expression des Antigens, das von dem monoklonalen Antikorper erkannt wird, zu untersuchen, konnen auch Zellen, die Rezeptoren fur ein kontaminierendes Protein tragen (z.B. Transferrinrezeptoren) markiert werden. c) Besondere Schwierigkeiten ergeben sich bei der Verwendung der Praparation von mAk in biologischen Testsystemen. Die erwartete Aktivitat des Antikorpers kann durch kontaminierende Immunmediatoren verandert werden. Da viele dieser Immunmediatoren heute noch nicht ausreichend gut definiert sind, last sich nicht ausschliesen, das sie auch nach sorgfaltiger Reinigung des Antikorpers noch immer in der Praparation vorhanden sind. In solchen Fallen konnte ein Antikorper der gleichen Immunglobulinsubklasse, der nicht mit dem fraglichen Antigen reagiert, aber aus derselben Fusion stammt und unter den gleichen Bedingungen hergestellt und gereinigt wurde, als Kontrollantikorper dienen.