山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化

本研究的目的是通过分子克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得山羊GST-Sox2融合蛋白。用RT-PCR方法从山羊（Capra hircus）肠组织克隆了c-Myc基因,通过TA克隆,构建了pMD18-T-Myc质粒。DNA测序证明,山羊c-Myc全长cDNA约1320bp,该序列包含一个完整的开放阅读框,编码439个氨基酸,经分析该序列与绵羊（Ovisaries）的c-Myc序列同源性为99.2%。将该cDNA片段亚克隆至pGEX-KG载体,构建了重组质粒pGEX-KG-Myc。经酶切鉴定和测序,将重组质粒导入大肠杆菌（Escherichia coli）BL21,由IPTG诱导表达,以谷胱甘肽-Sepharose4B亲和纯化GST-Myc融合蛋白。SDS-PAGE分析表明,纯化的GST-Myc融合蛋白约75kD,与预期值相符,且呈现清晰的单一条带。Western blot检测证实,该融合蛋白能够被GST抗体所识别。本实验克隆了山羊c-Myc基因,获得了高纯度的GST-Myc融合蛋白,为其多克隆或单克隆抗体的制备提供了基础资料,为山羊iPS细胞（induced pluripotent stem cells）检测创造了条件。