赤眼鳟 Toll 样受体3基因cDNA全长克隆及表达分析

为探究赤眼鳟（ Squaliobarbus curriculus ）Toll样受体3（Toll-like receptor 3， Sc TLR3）基因是否参与抗病毒免疫反应，实验运用RACE技术，克隆得到 ScTLR3 基因cDNA全长序列，并进行了生物信息学分析；通过Real-Time qPCR技术，检测了 ScTLR3 mRNA在健康赤眼鳟10个组织中的分布以及感染草鱼呼肠孤病毒（GCRV）后肝脏、脾脏、体肾和头肾中的表达特征。结果表明： ScTLR3 基因cDNA序列全长4043 bp，包括5’-非编码区（UTR）216 bp，开放阅读框（ORF）2715 bp和3’-UTR 1112 bp；ScTLR3共编码904个氨基酸残基，推导的蛋白分子量102.67 kD，理论等电点8.76；SMART结构域预测显示，ScTLR3由N端的信号肽（SP）、富亮氨酸结构域（LRRs）、跨膜结构域（TM）和C端的Toll/白介素-1受体结构域（TIR）组成。实时荧光定量结果显示，ScTLR3mRNA在检测的各组织中均有表达，肝脏中的相对表达量极显著高于其他组织（ P ScTLR3 mRNA均上调表达，肝脏、脾脏和体肾组织中的相对表达量在24h达到峰值，分别为对照组的5倍、7倍和6倍。研究表明，ScTLR3具有TLRs家族基因的典型结构特征，并能被GCRV诱导表达，推测其在赤眼鳟抗GCRV入侵免疫反应中发挥了重要作用。