Aeromonas sp. XJ-6双加氧酶基因的克隆、表达及对酪氨酸的降解

目的：从Aeromonas sp.XJ-6中克隆双加氧酶基因,初步探索该酶的功能,为芳香烃化合物的生物降解提供基因资源。方法：PCR扩增双加氧酶基因dio6,并实现该基因在大肠杆菌（Escherichia coli）中的诱导表达。产物经Ni-NTA柱纯化后,通过薄层层析（TLC）和HPLC检测双加氧酶dio6对Tyr的降解效果,再结合LC-MS检测降解产物,并分析其可能的降解途径。结果：Aeromonas sp.XJ-6双加氧酶基因dio6大小为1 194bp;通过金属鳌合亲和层析（MCAC）纯化后dio6表达产物的大小为44.9k Da。双加氧酶dio6对Tyr具有较强的降解作用。TLC和HPLC检测表明,在60μl酶量和30℃反应温度等条件下,Tyr降解较快;Mg^2＋、Ca^2＋略微抑制酶促反应,Mn^2＋、Zn^2＋、Cu^2＋、Fe^2＋、Ca^2＋促进底物降解,其中Mn^2＋对双加氧酶影响最大。LC-MS分析表明,在双加氧酶dio6作用下,Tyr被降解为延胡索酸。结论：Aeromonas sp.XJ-6双加氧酶dio6是一种苯环开环酶,为芳香烃化合物的生物降解提供了良好的基因资源。