Hibridação natural entre duas espécies de lambaris na cabeceira do Rio Grande e suas consequências na gametogênese e morfologia gonadal dos híbridos

A hibridacao e um processo relevante para ecologia, conservacao e evolucao das especies, mas sua ocorrencia natural e as consequencias na biologia dos hibridos ainda sao pouco estudadas. Alem disso, embora seja um evento que frequentemente leva a alteracoes gonadais nos hibridos, a morfologia das gonadas desses animais e as vias celulares envolvidas nessas alteracoes tem sido pouco investigadas. Neste sentido, o primeiro objetivo deste trabalho foi testar a hipotese que as duas especies de lambaris A. fasciatus e A. paranae, vivendo em simpatria na cabeceira do Rio Grande, sao capazes de intercruzar no ambiente natural e gerar hibridos. Para isso, utilizamos uma abordagem multidisciplinar que envolveu metodos de analises morfometrica e meristica dos peixes, estudo da biologia reprodutiva e morfologia gonadal, alem de sequenciamento de fragmentos dos genes mitocondrial (COI) e nuclear (S7). A analise anatomica mostrou caracteristicas intermediarias nos potenciais hibridos, enquanto as especies parentais apresentaram caracteres exclusivos. O estudo da biologia reprodutiva e gametogenese mostrou que A. fasciatus e A. paranae apresentam sobreposicao de periodo reprodutivo, similaridade na morfologia de gonadas e gametas, bem como nas estrategias reprodutivas. As analises geneticas suportaram a hipotese de hibridacao, uma vez que mostraram a existencia de duas especies distintas e um grupo intermediario, com DNA mitocondrial das duas especies, apesar de apresentarem um unico morfotipo e DNA nuclear apresentando picos duplos (coincidentes com os das especies A. fasciatus e A. paranae) no cromatograma do sequenciamento, indicando heterozigose. Em seguida, o objetivo foi explorar a morfologia gonadal dos hibridos e esta analise mostrou diversas alteracoes como ausencia de espermatides e espermatozoides em machos e de ovocitos pre-vitelogenicos e vitelogenicos em femeas, vacuolizacao e degeneracao de celulas germinativas, aumento de tecido intersticial e infiltrado inflamatorio, perda da organizacao de celulas germinativas em cistos ou ninhos, dados que indicaram a infertilidade dos hibridos. Por fim, o ultimo objetivo deste estudo foi testar a hipotese que autofagia, apoptose e proteinas de matriz extracelular estao envolvidas no processo de degeneracao das celulas germinativas e remodelamento tecidual nas gonadas dos hibridos. Para isso, imunolocalizamos as proteinas Beclin1, CatepsinaD, Caspase3, Fibronectina e Colageno tipo I. A quantificacao de todas as proteinas analisadas mostrou que os hibridos exibem maior area gonadal marcada para estas moleculas em relacao as especies parentais. Esses resultados indicam que as alteracoes morfologicas nas gonadas dos hibridos culminam em autofagia e degradacao lisossomal dependente de CatepsinaD, seguidas de apoptose e remodelamento tecidual com fibrose.