Nouvelles sondes oligonucléotidiques fluorescentes ou paramagnétiques : applications à l'étude structurale des lésions de l'ADN et à leur réparation sur support

L'ADN, support de l'information genetique, est constamment soumis a des stress l'endommageant. Ceci peut conduire a des modifications structurales de la molecule d'ADN et a des consequences biologiques nefastes de type mutagenese ou cancerogenese. Les lesions de l'ADN peuvent etre reparees par des complexes enzymatiques qui restaurent la sequence originale. Dans le present travail nous nous sommes interesses aux aspects structuraux des lesions de l'ADN et a leur reparation par excision de base (BER) ou par reversion (RR). Notre travail a consiste a developper un nouvel outil de type biopuce pour detecter ces activites de reparation par mesure de fluorescence. Pour cela des oligonucleotides leses auto-complementaires ont ete immobilises sur des lames de verre. Apres avoir mis au point les conditions d'immobilisation, par la chimie click, nous avons valide ce nouveau biocapteur pour la detection d'activites de reparation d'enzymes purifiees (glycosylases et AP-endonucleases) ou au sein d'extraits cellulaires. Utilisant un principe similaire, nous avons adapte cette biopuce pour mesurer les activites de reparation par reversion ainsi que pour le screening d'inhibiteurs. Dans une seconde partie de ce travail, nous avons applique la technique de resonance paramagnetique electronique pulsee (RPE pulsee) pour etudier la deformation structurale induite par plusieurs dommages de l'ADN. Pour cela nous avons developpe une methode de multi-marquage de l'ADN par des radicaux nitroxydes. Cette technique a alors ete appliquee pour la premiere fois a la detection d'une activite enzymatique de reparation de l'ADN.