Papel dos transposons de DNA da superfamília Tc1/mariner (TREM A-H) noreconhecimento de linhagens de fungos patogênicos do gênero Paracoccidioides

O genero Paracoccidioides e agente da paracoccidioidomicose, micose sistemica de distribuicao restrita a America Latina. O polimorfismo genetico entre os isolados de Paracoccidioides tem sido extensamente demonstrado por diferentes autores, atraves de diversas tecnicas moleculares. Trabalhos recentes revelaram a existencia de duas especies, P. lutzii e P. brasiliensis, sendo a primeira originalmente caracterizada como uma especie criptica denominada Pb01-like e aultima constituida de tres especies cripticas, denominadas S1, PS2 e PS3. Varios tipos de marcadores moleculares vem sendo propostos para a caracterizacao de especies cripticas no genero Paracoccidioides. Entretanto, a maioria despende tempo e emprega tecnicas bastante laboriosas e/ou caras. Elementos transponiveis tem sido usados no conhecimento da estrutura genetica de fungos patogenicos, auxiliando na definicao de grupos filogeneticamente relacionados e de importânciaepidemiologica. Um estudo recente no genoma de Paracoccidioides revelou a presenca de oito familias de transposons de DNA, denominadas TremA-H. Os elementos Trem estao distribuidos de forma desigual no genoma de isolados representativos de tres especies cripticas de Paracoccidioides (P. lutzii; PS2 e S1): TremC e H sao encontrados em todas as especies; TremA, B e F, nas especiescripticas PS2 e S1; TremD foi detectado apenas em S1 e TremE somente em P. lutzii. Este trabalho relata o emprego de reacoes de amplificacao em cadeia da polimerase (PCR) para avaliar a utilidade de tres marcadores moleculares na discriminacao de especies cripticas de Paracoccidioides: 1) par de iniciadores destinados a regiao de indel do gene hsp70; 2) marcadores microssatelites de DNA; 3) Trem A-H. Foram estudados 48 isolados de Paracoccidioides, sendo trinta previamente classificados segundo a especie criptica (10 de P. lutzii, 15 de S1, 3 dePS2 e 2 de PS3). 14 isolados puderam ser classificados como P. lutzii por meio do uso dos iniciadores dirigidos ao indel do gene hsp70, sendo os demais 34 isolados classificados como P. brasiliensis. Os marcadores microssatelites utilizados nao conseguiram discriminar os isolados entre as tres especies cripticas de P. brasiliensis. Os resultados obtidos pelo uso da PCR para deteccao de elementosTremA-H mostram que TremA, B, F e G sao encontrados apenas em P. brasiliensis (S1, PS2 e PS3); TremE esta presente apenas em P. lutzii; TremC e H estao presentes em P. lutzii e P. brasiliensis (S1, PS2 e PS3). E interessante ressaltar que em P. brasiliensis, a amplificacao de TremC e TremH mostrou um padrao de duas bandas enquanto que em P. lutzii, observou-se apenas uma banda de aproximadamente 2 kb. Em isolados PS3, TremD mostra um padrao de tres bandas. Estes resultados confirmam que os padroes de amplificacao observados para os oito elementos TremA-H e seu padrao esperado de bandas, podem ser uteis como marcadores moleculares especie-especificos no genero Paracoccidioides.