[Establishment of cisplatin-resistant melanoma cell line with stable expression of T-cadherin and its biological characteristics].

: 目的：建立稳定表达T-钙黏蛋白(T-cadherin)基因的顺铂(cisplatin，CDDP)耐药黑色素瘤B16F10细胞株(CDDP-R B16F10)，并研究其生物学特性。方法：采用大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法诱导CDDP-R B16F10细胞株。采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2- yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT]法检测CDDP-R B16F10细胞株的增殖能力，并观察CDDP-R B16F10细胞株对CDDP和紫杉醇的敏感性。将T-cadherin互补cDNA插入增强绿色荧光蛋白质粒(enhanced green fluorescent protein plasmid，pEGFP)-N1载体中，获得编码人T-cadherin的质粒载体pEGFP-N1-T-cadherin，再将pEGFP-N1-T-cadherin转染CDDP-R B16F10细胞。分别采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)、蛋白质印迹法和免疫组织化学SP法检测转染后耐药细胞株T-cadherin的mRNA及蛋白质表达情况。采用MTT法检测T-cadherin联合CDDP对CDDP-R B16F10细胞株增殖的影响，并观察转染T-cadherin后CDDP-R B16F10细胞株对紫杉醇的敏感性。结果：成功建立耐CDDP的CDDP-R B16F10细胞株。该细胞株同B16F10细胞株比较，其增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。CDDP-R B16F10细胞株和B16F10细胞株对CDDP的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration，IC50)分别为268.706和19.748 mg/L，耐药指数为13.61。CDDP-R B16F10细胞株和B16F10细胞株对紫杉醇的IC50分别为11.415和7.799 mg/L，耐药指数为1.46。重组真核表达载体pEGFP-N1-T-cadherin构建成功。RT-PCR，蛋白质印迹法和免疫组织化学SP法检测结果显示：CDDP-R B16F10可转录和表达T-cadherin。MTT法显示T-cadherin联合CDDP可抑制CDDP-R B16F10细胞株的增殖(P 0.05)。结论：成功建立了稳定表达T-cadherin的CDDP-R B16F10细胞株。T-cadherin可逆转CDDP-R B16F10细胞株对CDDP的耐药性，并能提高CDDP-R B16F10细胞株对紫杉醇的敏感性。.