Clonación molecular de los genes GDP-L-galactosa fosforilasa, L-galactosa deshidrogenasa y L-galactono-1.4-lactona deshidrogenasa de la vía biosintética de vitamina C en Myrciaria dubia (camu camu)

El objetivo del estudio fue realizar la clonacion molecular de los genes que codifican las enzimas, GDP-L-galactosa fosforilasa (GGF), L-galactosa deshidrogenasa (GDH) y L-galactono-1,4-lactona deshidrogenasa (GLDH) de la ruta biosintetica de vitamina C de Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh . Los frutos fueron obtenidos de la Coleccion Nacional de Germoplasma de M. dubia del Instituto Nacional de Innovacion Agraria. El ARN se purifico, se sintetizo el ADNc y amplifico con cebadores degenerados, se clono y secuencio con tecnicas estandares. Sobre la base de la secuencia obtenida se disenaron cebadores para posteriores estudios de expresion genetica. El ARN total purificado fue de alta calidad por los ratios de absorbancia (A /A = 1,9 ± 0,1, A /A = 4,0 ± 0,2) y la integridad del ARN (bandas visibles de ARN ribosomal 28S y 18S en el gel de agarosa). Con los cebadores degenerados se amplificaron con exito segmentos de los tres genes (GGF = 388 pb, GDH = 783 pb y GLDH = 921 pb) y disenaron cebadores especificos apropiados para estudios de expresion genetica mediante PCR en tiempo real. En conclusion, con las estrategias empleadas se realizo la clonacion molecular de segmentos de los genes GGF, GDH y GLDH que participan en la biosintesis de vitamina C en M. dubia .