Análise dos mecanismos antiproliferativos decorrentes da inibição farmacológica da enzima ácido graxo sintase em células de melanoma murino B16-F10 : resultados in vitro e in vivo

Acido graxo sintase (FASN - fatty acid synthase, EC 2.3.1.85) e a enzima metabolica responsavel pela sintese endogena do acido graxo saturado palmitato, a partir dos precursores acetil-CoA e malonil-CoA. Diversos estudos mostram que, em contraste com a maioria das celulas normais, FASN e altamente expressa em varios tipos de neoplasias malignas humanas, tais como as de prostata, mama e melanoma sendo que, em alguns destes tumores, a alta expressao de FASN esta associada a um pior prognostico. A inibicao da enzima FASN resulta em inibicao da proliferacao e induz morte celular em diversas neoplasias malignas. Recentemente demonstramos que, in vitro, a inibicao especifica da atividade de FASN em linhagem celular de melanoma murino, B16-F10, induz a via intrinseca da apoptose, com liberacao de citocromo c e ativacao de caspase-3, assim como altera a composicao dos acidos graxos livres presentes nas mitocondrias das celulas B16-F10. O objetivo deste trabalho foi investigar de que maneira a inibicao farmacologica de FASN reduz a proliferacao de celulas B16-F10, in vitro e in vivo, utilizando C75 como inibidor de FASN. O tratamento de celulas e animais com C75 reduziu significativamente a proliferacao celular e induziu apoptose. Houve significativa reducao de celulas na fase S do ciclo celular, com acumulo de celulas de G0/G1, em comparacao com os controles. Western blottings feitos a partir de extratos de celulas em cultura e de tumores intraperitoneais mostraram aumento de p21WAF1/Cip1, p27Kip1, reducao de Skp2 e cdk2, sem mudancas nos niveis de cdk4, 6 e ciclina E apos tratamento com C75. A especifidade destes resultados foi confirmada pela reducao da atividade enzimatica de FASN apos tratamento com C75 e pelo silenciamento de FASN com RNAi. Efeito anti-tumoral de C75 foi sugerido pela formacao de tumores subcutâneos de menor volume quando comparados aos tumores de animais controle. Nossos achados mostram que a proliferacao de celulas de melanoma e dependente de FASN, e que sua inibicao primeiramente altera os niveis de proteinas envolvidas na transicao de G1 para S, para posteriormente induzir apoptose em celulas de melanoma B16-F10. Abstract