Influencia del receptor P2X6 en la diferenciación del neuroblastoma N2a

Resumen: El ATP actua como un neurotransmisor excitatorio de accion rapida al unirse y activar los receptores purinergicos de tipo P2X. Estos receptores son una familia de canales ionotropicos regulados por ligando que permiten la entrada de calcio extracelular al citosol con la consiguiente despolarizacion en la membrana celular. Presentan dos dominios transmembrana unidos por un ancho lazo extracelular y un dominio carboxilo-terminal intracelular. Cada subtipo (P2X1-7) tiene una respuesta una activacion variable frente al ATP; tambien se ha comprobado que, dentro de esta familia, la expresion de los genes P2X6 varia conforme transcurre la diferenciacion y maduracion celular. Por ello, en este estudio se pretende averiguar si el nivel de expresion de los receptores P2X6 influye en el grado de diferenciacion de la linea celular de neuroblastoma murino N2a, caracterizada por su capacidad de diferenciacion al serle retirados los factores troficos del medio, y expresar P2X7 como unico receptor ionotropico purinergico. Tambien se pretendera averiguar su sublocalizacion celular. A tal fin, disenaremos y construiremos herramientas tanto para la sobreexpresion del receptor P2X6 fusionado a proteina fluorescente amarilla (YFP), como para el silenciamiento de su expresion mediante RNA de interferencia. La sobreexpresion del receptor y su silenciamiento se comprobo mediante western-blot y su presencia celular mediante inmunofluorescencia.