PRRSV NJ-a株ORF5基因A表位的修饰与糖基化位点的突变对其DNA疫苗免疫效力的影响

为了提高PRRSV ORF5基因的免疫效力，对ORF5基因进行了改造，将CpG序列和通用型辅助性T淋巴细胞表位插入A表位与B表位之间，并对N33与N51位糖基化位点进行了点突变，获得改造的ORF5基因。在此基础上构建了由两个CMV启动子调控的共表达改造的ORF5（MORF5）与ORF6基因的真核表达质粒pcDNA-M5A-6A。经Western-blot与IFA验证真核质粒的体外表达后，免疫6周龄Balb／c小鼠，利用微量中和试验检测免疫后的中和抗体，利用MTT法检测免疫后淋巴细胞的增生情况，并与未改造ORF5基因真核表达质粒pcDNA-5A-6A、弱毒疫苗以及灭活疫苗的免疫效果进行比较。结果表明，pcDNA-M5A-6A不但能够刺激免疫小鼠在较短的时间内产生更高水平的中和抗体，而且可以诱导产生更强烈的T淋巴细胞增殖反应。所构建的共表达PRRSV改造的ORF5基因与ORF6基因的DNA疫苗pcDNA-M5A-6A，能够较好的诱发小鼠产生较高的特异性针对PRRSV的中和抗体和细胞免疫应答，为研究能够更好地防制PRRSV的新型疫苗提供了新的思路。