Interactome of Ixr1, HMGB1 and HMGB2 proteins in relation to their cellular functions

espanolLa proteina de Saccharomyces cerevisiae Ixr1, y las proteinas humanas HMGB1 y HMGB2 se engloban dentro de la familia de proteinas HMGB. El principal objetivo de este trabajo ha sido la identificacion de proteinas no previamente descritas que se unen a Ixr1, HMGB1 y HMGB2, para asi poder ampliar el conocimiento sobre las funciones celulares de las proteinas HMGB. En levaduras, Ixr1 tiene un papel activador o represor de la transcripcion sobre distintos promotores y controla la respuesta a hipoxia. El dominio de activacion transcripcional de Ixr1 ha sido localizado en su extremo amino en este estudio. Ixr1 se une con Ssn8 y esta interaccion puede mediar su papel represor sobre los promotores de algunos genes. Ixr1 ademas interacciona con proteinas relacionadas con el metabolismo de glucosa, estres y biogenesis de ribosomas entre otras. Se ha detectado que Ixr1 presenta una fosforilacion diferencial en funcion de la disponibilidad de oxigeno. Se ha llevado a cabo un estudio del interactoma de HMGB1 y HMGB2 mediante tecnicas como el sistema de doble hibrido o purificaciones acopladas a espectrometria de masas en celulas epiteliales de ovario y prostata tumorales y no tumorales. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto la amplia variedad de funciones asociadas a las proteinas que interactuan con HMGB1 o HMGB2. Se ha validado la interaccion de HMGB1 con KRT7 y RBBP7 mediante otras tecnicas complementarias. Asi como tambien se han identificado interacciones especificas de HMGB1 en celulas tratadas con cisplatino. EnglishThe Saccharomyces cerevisiae protein, Ixr1, and human HMGB1 and HMGB2 proteins belong to the HMGB protein family. The main objective of this work was to identify new proteins binding Ixr1, HMGB1 and HMGB2 in order to increase the knowledge about their cellular functions. In yeast Ixr1 has activator or repressor activity on transcription in different promoters and controls the hypoxic response. The transcriptional activator domain of Ixr1 has been identified in its NH2 term in this study. Interactome studies show that Ixr1 binds to Ssn8 and this interaction might mediate the repressor function of Ixr1 on several promoters. Other proteins identified share functions associated to glucose metabolism, stress, and ribosome biogenesis among others. Differential phosphorylation of Ixr1 was observed depending on oxygen availability. The HMGB1 and HMGB2 interactomes were studied using different techniques as yeast two‐hybrid assays and purification methods coupled with mass spectrometry. This study was carried out in cancerous and noncancerous ovarian and prostate epithelial cells. Results showed the wide range of functions linked to their interacting partners. The interaction of HMGB1 with KRT7 and RBBP7 was validated by complementary techniques. HMGB1 specific interactions associated to cisplatin treatment of these cells were also identified in this study. galegoA proteina de Saccharomyces cerevisiae Ixr1, e as proteinas humanas HMGB1 e HMGB2 englobanse dentro da familia de proteinas HMGB. O principal obxectivo deste traballo foi a identificacion de proteinas non previamente descritas que se unen a Ixr1, HMGB1 e HMGB2, para asi poder ampliar o conecemento sobre as funcions celulares das proteinas HMGB. En levedos, Ixr1 ten un papel activador ou represor da transcricion sobre distintos promotores e controla a resposta a hipoxia. O dominio de activacion transcripcional de Ixr1 foi localizado no seu extremo amino neste estudo. Ixr1 unese con Ssn8 e esta interaccion pode mediar o seu papel represor sobre os promotores dalguns xenes. Ixr1 ademais, interacciona con proteinas relacionadas co metabolismo de glicosa, stress e ribosomais entre outras. Detectouse que Ixr1 presenta unha fosforilacion diferencial en funcion da disponibilidade de osixeno. Levouse a cabo un estudo do interactoma de HMGB1 e HMGB2 mediante tecnicas como o sistema de dobre hibrido ou purificacions e espectrometria de masas en celulas epiteliais de ovario e prostata tumorais e non tumorais. Os resultados obtidos ponen de manifesto a ampla variedade de funcions asociadas as proteinas que interactuan con HMGB1 ou HMGB2. Hase validado a interaccion de HMGB1 con KRT7 e RBBP7 mediante outras tecnicas complementarias. Asi como tamen se identificaron interaccions especificas de HMGB1 en celulas tratadas con cisplatino