重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6（E）对耐顺铂卵巢癌细胞增殖与侵袭转移的影响

目的 观察重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6（E）对卵巢癌顺铂（DDP）耐药细胞株SKOV3/DDP增殖及侵袭转移的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SKOV3/DDP细胞经融合蛋白处理后的增殖抑制率及采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）后融合蛋白对DDP敏感性的影响,单丹磺酰尸胺染色法检测融合蛋白诱导的自噬情况,QPCR和Western blotting检测SKOV3/DDP细胞Beclin 1的表达情况,Transwell体外迁移和重组基底侵袭实验研究融合蛋白对SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移能力。结果 DDP对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度（IC_（50））为（37.62±2.63）μg/ml,10、20、40μg/ml融合蛋白作用后,DDP的IC_（50）分别降低至（17.07±0.88）、（11.08±0.57）和（1.96±0.31）μg/ml（P〈0.001）;以3-MA抑制细胞自噬,可阻断融合蛋白诱导SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性;SKOV3/DDP自噬情况的比较：融合蛋白组、融合蛋白＋3-MA组的荧光强度分别为824±107、459±128,均高于对照组的306±143,差异有统计学意义（P〈0.05）。Beclin 1 mRNA和蛋白的表达水平随融合蛋白的浓度增加（10、20、40μg/ml）,其表达水平升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。空白对照组、DDP组、融合蛋白组和DDP＋融合蛋白组中SKOV3/DDP细胞的Beclin 1蛋白表达亦不同,差异有统计学意义（P〈0.05）,其中DDP＋融合蛋白组蛋白表达量最高,为0.876±0.023,其次为融合蛋白组的0.564±0.021。融合蛋白能明显抑制SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移能力,DDP＋融合蛋白组和融合蛋白组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,DDP组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 融合蛋白可抑制SKOV3/DDP细胞的增殖、侵袭和转移,可能与诱导自噬及上调Beclin 1的表达有关。