Búsqueda de marcadores de embarazo ectópico en sangre periférica

Motivacion: El embarazo ectopico es una anomalia en la implantacion embrionaria y complicacion ginecologica grave que afecta a mas de un 1% de los embarazos naturales y hasta un 8% de las embarazadas en reproduccion asistida, segun las fuentes. Los metodos diagnosticos de embarazo ectopico a dia de hoy se basan exclusivamente en metodos ecograficos y en medidas seriadas de B-hCG metodos que, en muchas ocasiones, se prolongan por una semana o mas, para llegar a un diagnostico fiable. En el Reino Unido el diagnostico del embarazo ectopico genera un gasto anual de 12 millones de euros², datos extrapolables al resto de Europa. La existencia de un buen marcador de embarazo ectopico sustituiria la realizacion del test diario de β-hCG, siendo el mercado potencial de unos 13 millones de analisis por ano. Metodos: Se recogieron seis muestras de sangre procedentes de mujeres con embarazo ectopico y otras seis de mujeres con embarazo intrauterino con edades gestacionales similares (entre 7 y 10 semanas) se almacenaron a -20oC en tubos PAXGene hasta su posterior analisis. La extraccion del RNA se realizo utilizando el metodo del Trizol (Sigma-Aldrich). Todas las muestras fueron hibridadas utilizando el “Whole Human Genome Oligo Microarray” (Agilent Technologies) que contiene mas de 44.000 sondas para el genoma humano. El microarray hibridado se escaneo mediante el escaner Axon 4100 (Molecular Devices) y los datos se extrajeron con el software Genepix 6.0 (Molecular Devices). El analisis de datos se llevo acabo con la plataforma GEPAS. Resultados: Se utilizaron seis muestras de embarazo ectopico y seis muestras de embarazo intrauterino para el analisis de microarray. Se genero una lista de 17 potenciales marcadores de embarazo ectopico con un fold change >4 o <-4 y con un p valor <0.05. De estos 17 genes se han validados por PCR cuantitativa los siguientes: ORM1, ORM2, LAMP3 y UTS2 utilizando nuevas muestras de embarazo ectopico (n=8) y de embarazo intrauterino (n=7). Despues de descartar los valores atipicos se confirmaron algunos resultados del microarray. Conclusiones: Los resultados del microarray mostraron un total de 17 genes desregulados entre embarazos ectopicos e intrauterinos, concretamente 10 se sobre expresaban y 7 de ellos disminuian su expresion. Los genes ORM1, ORM2, LAMP3 y UTS2 se comprobaron por qPCR y mostraron diferencias significativas. . Al final de este estudio se comprobaran el resto de genes y se podra disenar un test de embarazo ectopico.