菊花TAS3 tasi-RNA靶基因 CmARF4 的鉴定及表达分析

目的本文旨在鉴定菊花TAS3 tasi-RNA的靶基因生长素响应因子CmARF4，并探讨该基因的表达特性。 方法以菊花品种‘神马’为材料，利用高保真PCR方法克隆CmARF4基因全长，采用5'RLM-RACE技术验证CmARF4基因是否含有TAS3剪切位点，通过qPCR分析CmARF4基因在不同组织器官中和生长素处理及盐处理条件下的表达水平。 结果CmARF4为TAS3 tasi-RNA的靶基因，其剪切位点位于TAS3 5'端的第10与第11位碱基之间。CmARF4基因包含开放阅读框（ORF）2 322 bp，编码773个氨基酸，预测其蛋白质相对分子质量为85.7×103，理论pI为6.44，且与刺菜蓟的同源性最高（78.63%）。在营养生长期，芽中CmARF4的表达量最高，茎中次之；在盛花期舌状花中CmARF4的表达量最高，其次是茎。亚细胞定位与转录激活活性分析结果显示：CmARF4蛋白定位在细胞核上，且无转录激活活性。CmARF4响应生长素处理，当萘乙酸（NAA）浓度为5 μmol·L-1时，CmARF4基因的相对表达量在12 h时明显升高；当NAA浓度为15 μmol·L-1时，CmARF4的相对表达量呈上升趋势。200 mmol·L-1 NaCl处理下，CmARF4的相对表达量在盐胁迫1 h时升至最高，之后逐渐下降。 结论CmARF4基因为TAS3 tasi-RNA的靶基因，CmARF4的转录水平受生长素及盐处理的诱导。