Estudio de la expresión inmunohistoquímica de PD-L1 en las células tumorales y en las células inmunes asociadas al tumor en el carcinoma de células pequeñas de pulmón

El bloqueo de los puntos de control inmune con anticuerpos monoclonales ha surgido recientemente como una nueva herramienta terapeutica en el campo de la oncologia. Uno de dichos puntos de control esta regulado por el receptor PD-1 (Programmed cell death 1) presente en la superficie de las celulas T y encargado de la regulacion de la activacion y proliferacion de esta subpoblacion linfocitaria. Su ligando, PD-L1, es expresado por diferentes tipos de celulas neoplasicas; se ha descrito que la inhibicion de esta ruta con anticuerpos anti PD-1/PD-L1 es capaz de ejercer una accion antitumoral. Un mejor conocimiento del microambiente inmune asociado al carcinoma de pulmon de celulas pequenas (CPCP) mediante su caracterizacion inmunohistoquimica, asi como la cuantificacion del biomarcador de inmunoterapia PD-L1, aportaria una informacion de gran interes, que potencialmente permitiria la identificacion y seleccion de los pacientes en los que el uso de terapias basadas en el restablecimiento del sistema inmune tendrian un mayor beneficio. Estudio de la expresion inmunohistoquimica de PD-L1 en el CPCP, tanto en las celulas tumorales como en los infiltrados inflamatorios asociados al tumor (TILs), e incluyendo la valoracion en ambos tipos celulares del porcentaje global de expresion de dicho marcador, la intensidad de tincion, el patron de tincion intracelular y la localizacion de las celulas PD-L1+ en los distintos componentes del tumor (estroma y nidos epiteliales neoplasicos) segun los patrones definidos en el estudio y, en relacion a los TILs PD-L1+, las diferencias en su composicion celular. Evaluacion del microambiente inmune del CPCP, valorando tanto su cuantia global como la composicion celular en el estroma y en los nidos tumorales. Valoracion de la correlacion de las distintas caracteristicas de la expresion de PD-L1 entre si, de las observadas en las celulas tumorales con respecto a las de los TILs y de ambas en relacion a las variables clinicas de la serie. Comparacion de los resultados obtenidos con los datos existentes hasta la fecha sobre la expresion de PD-L1 en el CPCP. MATERIALES Y METODOS Se realizo un estudio retrospectivo sobre 90 muestras con diagnostico histologico de CPCP correspondientes a biopsias diagnosticas o piezas quirurgicas fijadas en formol e incluidas en parafina procedentes del archivo del Servicio de Anatomia Patologica del Hospital Universitario HM Sanchinarro. A partir de los bloques seleccionados se obtuvieron nuevos cortes sobre los cuales se realizo el estudio inmunohistoquimico, que incluyo PD-L1 y CD8 y para cuya realizacion se empleo una plataforma de tincion inmunohistoquimica automatizada siguiendo protocolos de laboratorio optimizados e incluyendo controles positivos y negativos. El estudio microscopico de cada uno de los casos se llevo a cabo sobre las celulas tumorales y sobre los infiltrados inflamatorios asociados al tumor, e incluyo: 1) la valoracion automatizada de los linfocitos T CD8+ en el estroma tumoral y en los nidos neoplasicos; 2) la evaluacion al microscopio optico de los datos relativos a la expresion de PD-L1 previamente descritos (expresion porcentual, patron de tincion intracelular, patron de localizacion de las celulas PD-L1+ en los distintos componente de la neoplasia y patrones de composicion celular de los TILs PD-L1+). De manera paralela se creo una base de datos donde se incluyeron las observaciones citadas asi como la informacion clinica de la que se dispuso para cada caso (edad, sexo, ECOG, localizacion del tumor al diagnostico, estadio TNM, tratamiento, aparicion de recidiva, estado en el ultimo seguimiento y supervivencia global, entre otros). Por ultimo se realizo el analisis estadistico de los datos mediante el uso de los tests pertinentes. En una serie de 90 muestras de carcinoma de pulmon de celulas pequenas (CPCP), se ha observado, en las celulas tumorales, tincion inmunohistoquimica positiva para PD-L1 en el 48,89% de los casos. En las celulas inflamatorias asociadas al tumor o TILs, este porcentaje asciende al 58,89%. En las celulas tumorales, el patron de tincion predominante ha sido el intenso sobre el debil, observandose en el 88,64% de los casos. Respecto al patron de tincion intracelular, un 54,55% de los casos presenta mayor tincion en el citoplasma que en la membrana. En los TILs tambien se ha observado predominio de la tincion intensa en el 94,34% de los casos. Al contrario que en las celulas tumorales, el patron de tincion intracelular predominante ha sido el membranoso (50,94% de los casos). Las celulas tumorales PD-L1+ se situaban mayoritariamente en la zona periferica de los nidos tumorales (70,45%). En los TILs PD-L1+ se ha observado un discreto predominio de la presencia simultanea tanto en estroma como en los nidos neoplasicos (50,94%) frente a la localizacion exclusiva en el estroma o en el interior de los agregados tumorales (41,51% y 7,55%, respectivamente). En la composicion celular de los TILs PD-L1+, el linaje celular predominante ha sido la estirpe macrofagica sobre la linfocitaria (45,28% de los casos). En los casos de TILs con celulas PD-L1+ en cuantia menor al 1%, la composicion celular se invertia predominando los linfocitos sobre los macrofagos. No hemos encontrado asociacion estadisticamente significativa entre la expresion inmunohistoquimica de PD-L1, tanto en las celulas tumorales como en los TILs, con ninguna de las variables clinicas evaluadas. La ausencia de expresion de PD-L1 en las celulas tumorales, aunque no llega a alcanzar significacion estadistica, muestra una tendencia a la asociacion con la recidiva tumoral (p=0,057). La agrupacion de los tumores en base al estatus combinado de expresion de PD-L1 en celulas tumorales y en los TILs ha mostrado que, en el CPCP, los grupos mas numerosos son aquellos que muestran concordancia en el resultado de la tincion para este biomarcador en ambos componentes de la neoplasia. Esta agrupacion no se asocio de manera estadisticamente significativa con ninguna de las variables clinicas evaluadas, a excepcion de la afectacion ganglionar (p=0,005) y el estado del paciente en el ultimo seguimiento (p=0,011). En el CPCP el analisis de la tincion inmunohistoquimica de PD-L1 en las celulas tumorales y en los TILs segun los intervalos recogidos por la IASLC para el clon SP142 supone una disminucion del porcentaje total de casos con celulas tumorales y/o inflamatorias PD-L1+. Al agrupar las celulas tumorales PD-L1+ segun las categorias TC se observa una asociacion estadisticamente significativa entre el porcentaje de celulas positivas para este biomarcador y la intensidad de tincion (p<0.001). Esta agrupacion en categorias no ha mostrado asociacion estadisticamente significativa con ninguna de las variables clinicas incluidas en el estudio. En relacion a las categorias IC, se ha observado una asociacion estadisticamente significativa de esta agrupacion con el estadio en terminos de enfermedad localizada versus enfermedad extensa. En nuestra serie, los pacientes con enfermedad localizada se incluian mayoritariamente en la categoria IC3, mientras que aquellos con enfermedad extensa pertenecian en su mayor parte a la categoria IC0. En esta misma linea de resultados, hemos encontrado que los casos clasificados en la categoria IC0 tienen mayor capacidad de dar metastasis a distancia (estadio M1) que los casos clasificados en la categoria IC3 (62,86% versus 39,13% respectivamente, p=0,038). Tal y como hemos comentado previamente, el grupo de Ishii et al (2015) encuentra que la expresion de PD-L1 en las celulas tumorales del CPCP confiere buen pronostico en terminos de supervivencia global y enfermedad limitada, incluso en el analisis multivariante. Con respecto al papel de la expresion de este biomarcador en las celulas inflamatorias, hasta el momento no hay trabajos publicados que clarifiquen este punto, por lo que los resultados obtenidos en esta serie necesitarian ser refrendados en estudios mas amplios que permitieran demostrar la importancia de la expresion de PD-L1 en el componente inflamatorio del CPCP. En el CPCP, el numero de linfocitos T CD8+/mm2 es mayor en el estroma que en el interior de los nidos neoplasicos. Esta distribucion se mantiene independientemente de la categoria TC y en todas las categorias IC a excepcion de la IC1, donde el numero de linfocitos T CD8+/mm2 es mayor en los nidos neoplasicos.