三叶青总黄酮通过Wnt/β-catenin通路抑制结肠癌细胞周期及增殖

目的三叶青总黄酮（Total Flavonoids of Tetrastigma Hemsleyanum,TFTH）对多种肿瘤具有较强的抑制作用。分析TFTH对结肠癌细胞周期及细胞增殖能力的影响,并进一步探索其分子机制。方法采取CCK-8试验及克隆形成试验检测不同浓度TFTH（0、1.6、3.2及6.4 mg/mL）对人结肠癌细胞HT29及SW620细胞增殖能力的影响,并运用流式细胞术检测不同浓度TFTH对肿瘤细胞周期的调节作用;通过免疫印迹及实时荧光定量聚合酶链反应等方法证实TFTH对Wnt/β-catenin通路有效调控及细胞周期相关蛋白Cylin D1和c-myc的表达。结果在0、1.6、3.2和6.4 mg/mL TFTH孵育后,SW620细胞在6孔板中形成的克隆数量分别为（196±25.06）、（75.33±7.64）、（19±6.08）、0个/孔,HT29细胞为（206.67±30.55）、（106±12.17）、（9.67±4.04）、0个/孔,各浓度间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结肠癌细胞S＋G2/M期细胞的比例降低（P〈0.05）,且呈浓度依赖性。同时,TFTH干预的HT29细胞及SW620细胞内活化的β-catenin蛋白的表达随药物浓度增高而逐渐降低,将0、1.6、3.2和6.4 mg/mL TFTH作用于SW620细胞后,a-β-catenin蛋白的IOD分别为231.46±20.66、109.42±15.58、63.14±2.33、6.38±11.05;作用于HT29细胞时,其IOD分别为817.28±76.55、566.10±96.80、324.23±53.51、141.67±34.35,与0 mg/mL相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）,进一步研究发现,与0 mg/mL相比,1.6、3.2、6.4 mg/mL的TFTH干预后细胞内Cyclin D1和c-myc在mRNA及蛋白质水平的表达也显著下调（P〈0.05）。结论 TFTH抑制结肠癌细胞增殖能力,其作用机制与下调肿瘤细胞Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制细胞周期有关。