Etudes structurales et fonctionnelles de l'IRES du VHC

L'IRES du VHC est organise en une structure secondaire, complexe et hautement conservee comprenant quatre domaines distincts (I-IV). Cette organisation permet la liaison directe du facteur d'initiation eucaryote eIF3 et de la sous-unite 40S du ribosome. eIF3 est un complexe de 13 proteines (~ 800 kDa). Certaines de ses sous-unites montrent une affinite pour l'ARN, et parmi elles deux possedent des motifs de reconnaissance a l'ARN (MRR) : eIF3b et eIF3g. Afin de determiner l'implication de ces motifs dans l'interaction ARN-proteine, nous avons clone les domaines contenant ces motifs MRR. Nous avons etudie l'interaction de l'ARN et/ou domaines d'ARN avec le complexe eIF3 et/ou proteines ou domaines proteiques. Nous avons ainsi calcule les differentes constantes apparentes de dissociation entre ces different complexes. Ces resultats indiquent que la sous-unite eIF3b se lie directement au domaine III de l'IRES via son motif MRR. Dans un deuxieme temps, nous avons utilise la spectroscopie RMN pour identifier precisement les acides amines impliques dans cette reconnaissance. Enfin, la technique de SAXS a ete mise a profit pour etudier la structure tridimensionnelle de l'IRES.