Identifikation und Charakterisierung des Adenovirus E1A-Proteine bindenden zellulären Faktors r-SREC

Die adenoviralen E1A-Proteine sind fur die Expression aller anderen viralen Gene essentiell und modulieren zudem die Expression spezifischer zellularer Gene um eine effiziente Replikation des viralen Genoms zu gewahrleisten. Dabei vermitteln sie ihre Funktionen uber Protein-Protein-Interaktionen mit zellularen Proteinen, die u.a. an der Regulation des Zellzyklus, der Differenzierung und der Apoptose beteiligt sind. Im Zuge der vorliegenden Arbeit konnte ich eine Volllangen cDNA identifizieren, die fur einen bisher nicht beschriebenen E1A-Proteine-bindenden, zellularen Faktor (r-SREC) mit einem offenen Leseraster von 366 Aminosauren kodiert. Meine Experimente haben gezeigt, dass sowohl Ad12 E1A- als auch Ad2/Ad5 E1A-Proteine in vitro und in vivo effizient mit dem r-SREC-Protein interagieren. Durch in vitro Protein-Protein-Interaktionsstudien konnte ich die konservierte Region 2 und den N-terminalen Bereich (AS 1-79) der E1A-Proteine als die fur diese Interaktion verantwortlichen Proteindomanen identifizieren. Die Expression der nativen mRNA konnte in Rattengeweben (Herz, Hirn, Lunge, Niere und Hoden) in einer Grose von 1,6 und 3,4 kb sowie in humanen Geweben (Herz, Hirn, Plazenta, Lunge, Leber, Skelettmuskel, Niere und Pankreas) in einer Grose von 4,4 kb nachgewiesen werden. Weiterfuhrende Experimente zeigten, dass das r-SREC-Protein in der Zelle sowohl in Ab- als auch in Anwesenheit der E1A-Proteine cytoplasmatisch lokalisiert ist. Hier konnte jedoch beobachtet werden, dass die Koexpression der E1A-Proteine zu einer erhohten Konzentration des r-SREC-Proteins in einem distinkten Bereich an der Kernmembran fuhrt. Meine Daten belegen weiterhin, dass r-SREC in transienten Expressionsstudien trotz seiner cytoplasmatischen Lokalisation die E1A13S-vermittelte Aktivierung der viralen Promotoren E2Ad12 und G5-E1B TATA reprimiert.