Desarrollo y validación de nuevas metodologías para la caracterización de la interacción de ligandos con ADN. Estudio de la

El diseno de compuestos con capacidad de union a secuencias especificas de ADN tiene gran importancia en farmacologia dado que existen numerosos farmacos que tienen el ADN como diana y cuya actividad terapeutica se basa en la afinidad y selectividad de su interaccion con el mismo. Por otro lado, estos ligandos de bajo peso molecular con capacidad de union a secuencias predeterminadas de ADN pueden ser herramientas de gran utilidad en biologia molecular. Para comprender en toda su complejidad la interaccion entre el ADN y estos ligandos se debe combinar la caracterizacion del mecanismo de union a resolucion practicamente atomica, con datos termodinamicos de las energias de union a oligonucleotidos. Existen diversos metodos para estudiar esta union pero generalmente presentan desventajas como el alto coste por ensayo (en tiempo, reactivos o fungible), falta de sensibilidad o imposibilidad de automatizacion. De ahi la utilidad del objetivo principal de esta Tesis: desarrollar un ensayo rapido y eficaz, capaz de identificar el sitio preferente de interaccion entre el ADN y compuestos de diferente naturaleza. A lo largo de esta Tesis se expondra el desarrollo, validacion y aplicaciones de un metodo novedoso, basado en el analisis de curvas de fusion de ADN y que puede ser considerado como metodo de alto rendimiento para cribado de un gran numero de compuestos que se unan al ADN. Este metodo aporta mejoras significativas en aspectos como consumo de reactivos y de tiempo por ensayo, que tradicionalmente han limitado la determinacion experimental de la selectividad de secuencia ligando-ADN. Asi, finalmente, ha podido aplicarse esta metodologia al estudio de la interaccion con ADN de una quimioteca formada por decenas de compuestos heteroaromaticos cationicos con N cuaternario en posicion cabeza de puente.