IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE FUNGOS FILAMENTOSOS PRODUTORES DE PIGMENTOS

O sequenciamento de DNA e uma ferramenta importante para a identificacao de microrganismos e o espacador transcrito interno (ITS) e a regiao mais utilizada para a identificacao de fungos. Porem, para alguns generos um marcador secundario se faz necessario para identificacao ao nivel de especie. O objetivo desse trabalho foi identificar molecularmente 13 fungos filamentosos produtores de pigmentos utilizando pares de oligonucleotideos que amplificam parcialmente os genes ITS, β-tubulina, calmodulina e segunda subunidade maior da RNA polimerase (RPB2). Os fungos foram isolados de cavernas brasileiras e como endofiticos da planta Eremanthus sp. O DNA total dos fungos foram extraidos e o PCR realizado com as condicoes de reacao ja definidas para cada par de oligonucleotideo. Os fragmentos de DNA amplificados foram sequenciados e as sequencias obtidas editadas no software Sequencher 5.4.1, analisadas utilizando o programa BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Para maior confiabilidade dos resultados foram considerados para a identificacao de 99 a 100% de identidade de nucleotideos. Tres dos fungos foram identificados apenas pelo ITS como Epicoccum nigrum. Foram identificados Aspergillus keweii e Lecanicillium aphanocladii utilizando os oligonucleotideos ITS e RPB2. Tambem foram identificados especies de Aspergillus sydowii, Aspergillus aureolatus, Penicillium flavigenum, e Penicillium chermesinum utilizando ITS, RPB2 e calmodulina. Um fungo foi identificado como Fusarium graminearum utilizando os oligonucleotideos RPB2, calmodulina e β-tubulina. Dois fungos, nao puderam ser identificados utilizando as sequencias obtidas utilizando os oligonucleotideos descritos. A identificacao tradicional sera realizada visando confirmar os resultados moleculares obtidos e uma possivel indicacao das 2 especies nao identificadas.