Mantenimiento de la inactivación del cromosoma X: exploración con RNA-interferente contra el gen de susceptibilidad a cáncer de mama (BRCA1)

La inactivacion del cromosoma X (XCI) es un evento epigenetico que suprime muchos genes en uno de los dos X en los mamiferos hembras. El mantenimiento de ese estado excepcional de herencia somatica depende en parte del remodelamiento de la cromatina. Hace tres decadas publicamos la primera evidencia de la existencia de dos Xa en celulas de cancer de mama. Y evidencias recientes involucran a la proteina BRCA1 con remodelacion cromatinica. Partiendo de estas observaciones, una citogenetica y otra molecular, planteamos la posible relacion entre BRCA1 y XCI. Para investigarlo, se abrogo la expresion de BRCA1 en celulas XiXa, utilizando shRNAs contra el mRNA de la proteina BRCA1. De los clones recombinantes en DH5alpha, se extrajeron los plasmidos psiSTRIKE-Neo-shRNAs, y con ellos se lipo-transfectaron celulas XiXa. Mediante Western-blot se confirmo el silenciamiento de la proteina BRCA1. Con la secuencia Sh2-RNA de mayor grado de silenciamiento anti BRCA1, se encontro expresion QRT-PCR aumentada en las transfectadas, y para los genes POLA1, PGK1 y OCRL ligados a regiones que no escapan a la inactivacion, y para el gen control ZFX que normalmente si escapa a la inactivacion (control interno). En conclusion, aunque el RNAi anti-BRCA1 no afecta la metilacion de promotores de los genes examinados sintenicos al X, si perturba sus niveles de expresion, sugiriendo que BRCA1 si puede afectar el estado de mantenimiento de inactivacion de esos loci, lo cual no es incompatible con la postulada accion epigenetica de BRCA1 sobre la remodelacion de la cromatina.