Nouveaux subtrats Q-tag pour le développement d’ADCs site spécifique par activité enzymatique transglutaminase

Es ADCs (Antibody-Drug Conjugates) correspondent a une nouvelle strategie therapeutique anti-tumorale particulierement prometteuse. Neanmoins, les ADCs actuellement utilises en clinique sont obtenus par conjugaisons chimiques, resultant en des mixtures heterogenes impactant negativement leurs pharmacocinetiques et leurs performances in vivo.Recemment, differentes strategies de couplage site-specifique ont ete developpees afin de reduire cette heterogeneite. Dans cette these, nous rapportons le developpement d’une nouvelle technologie CovIsoLink™ (Covalently Isopeptide Crosslinking) permettant la generation d’ADCs par utilisation de nouveaux peptides glutamine Q-Tag presentant des affinites optimisees par rapport a des peptides disponibles (ZQG, LLQG) pour une enzyme bacterienne la transglutaminase (mTG).La preuve de concept de cette technologie a ete realisee par insertion de ces peptides Q-Tag en C-ter de la region codant pour la chaine lourde des anticorps anti-HER2 (Trastuzumab). Nous avons ainsi pu demontrer la conjugaison homogene et reproductible de differentes drogues sans contamination par des chaines d’anticorps non conjuguees. Nous avons pu montrer que l’immunoreactivite et la capacite d’internalisation de ces ADCs n’etaient pas alterees par la conjugaison et qu’ils presentaient in vitro et in vivo, des proprietes de lyse de cellules tumorales similaires au Trastuzumab emtansine (Kadcyla®), actuellement en clinique. Par ailleurs, afin de generaliser notre technologie a differents formats d’anticorps nous avons generes des fragments Fab et scFv et evalue leur fonctionnalite. Ainsi, nous avons pu prouver que l’utilisation de nouveaux peptides optimises Q-Tag substrat de la transglutaminase permettait une strategie de couplage alternative plus homogene par couplage de differentes molecules sans espece contaminante non couplee