Avaliação da PCR-TR na detecção de Haemophilus influenzae em amostras de secreção de nasofaringe de crianças saudáveis

Haemophilus influenzae (Hi) e um microrganismo que faz parte da microbiota transitoria da nasofaringe humana e, eventualmente, pode causar doencas em individuos suscetiveis. A vacina Hib conjugada alem de proporcionar uma protecao direta contra a doenca nos vacinados, tambem reduz a colonizacao da nasofaringe pelas cepas vacinais. Os estudos de portador de Hi na populacao permitem a caracterizacao das cepas circulantes, portanto a identificacao correta do microrganismo e de fundamental importância para estimar com acuracia o efeito da vacina. A tecnica padrao-ouro para detectar Hi em material clinico e a cultura, um metodo especifico, de sensibilidade variavel e que demanda maior tempo para a completa identificacao do microrganismo. O uso de tecnicas moleculares tem auxiliado na diferenciacao de Hi de outras especies do genero Haemophilus, devido a alta sensibilidade e especificidade para detectar o agente etiologico. Diferentes ensaios de PCR-TR e PCR foram desenvolvidos para o diagnostico de Hi utilizando diferentes genes alvo especificos como o gene hpd e o gene fucK. Estes genes sao altamente conservados e permite a deteccao de Hi capsulado e nao capsulado. O principal objetivo deste estudo foi avaliar a acuracia da PCR-TR utilizando o marcador molecular hpd#3 para detectar o Hi na secrecao de nasofaringe de criancas saudaveis comparando-a com a cultura. Um total de 410 amostras de secrecao de nasofaringe estocadas a -70oC em meio STGG foi selecionado aleatoriamente para esta avaliacao. Pela PCR-TR, 161 (39,2%) amostras foram positivas para o gene hpd e 249 (60,8%) negativas. Pela cultura, 166 (40,5%) amostras foram positivas para Hi e 244 (59,5%) culturas negativas. Sendo assim, a PCR-TR apresentou uma sensibilidade de 90,9% (95% IC: 85,3-94,7) e especificidade de 95,9% (95% IC: 92,4-97,9) quando comparada a cultura para detectar Hi... Haemophilus influenzae (Hi) colonizes the human nasopharynx and eventually can cause diseases in susceptible individuals. The Hib conjugate vaccine provides direct protection against the diseases and also reduces nasopharyngeal colonization by vaccine strain. Hi carriage studies allow the knowledge of circulating strains and the accurate identification of the microorganism is important to estimate the effect of the vaccine. Culture is the gold standard method to detect Hi in clinical samples, this is a specific method, with variable sensitivity and demand more time for the complete identification of the microorganism. The use of molecular techniques has helped in differentiating Hi from other species of the Haemophilus spp. due to the high sensitivity and specificity to detect the etiologic agent. Different RT-PCR and PCR assays were developed for the diagnosis of Hi using several biomarker genes such as hpd and fucK gene. These genes are highly conserved and are present in encapsulated and non-encapsulated Hi strains, allowing the detection of both variants. The aim of this study was to evaluate the accuracy of RT-PCR to detect Hi in nasopharyngeal samples of healthy children vaccinated against Hib comparing it with the culture. A total of 410 nasopharyngeal swabs stored at -70°C in STGG medium were randomly selected to evaluate RT-PCR assay targeting protein D (hpd#3). Considering the 410 nasopharyngeal swabs, 161 (39.2%) samples were positive for Hi and 249 (60.8%) had negative RT-PCR. By culture, 166 (40.5%) samples were positive for Hi and 244 (59.5%) were negative. Thus, the hpd#3 RT-PCR showed a sensitivity of 90.9% (95% CI: 85.3 - 94.7) and a specificity of 95.9% (95% CI: 92.4 - 97.9) when compared to culture to detect Hi in nasopharyngeal swabs. The results showed no significant difference (McNemar's chi-square = 0.64 p>0.5) between RT-PCR and culture and the Kappa coefficient showed an excellent agreement (0.873) between the two techniques...