miR-200c和miR-429靶向调节绵羊皮下脂肪细胞中 SCD 1表达的研究

旨在预测并验证调节绵羊皮下脂肪细胞中SCD1基因表达的关键miRNAs。本研究利用4个生物信息学软件TargetScan、mirDB、StarBase和miRanda预测与该基因具有靶标关系的关键miRNAs；利用双荧光素酶报告系统验证SCD1基因与miRNAs的靶标关系；利用荧光定量PCR和Western-blotting技术，分别在mRNA和蛋白水平上检测miRNAs对SCD1 mRNA和蛋白质表达的影响。预测结果表明，miR-200c和miR-429是调控SCD1基因表达的关键miRNAs；双荧光素酶报告系统检测证明，2个miRNAs与SCD1基因都具有靶标关系；荧光定量PCR显示，miR-200c和miR-429显著抑制SCD1 mRNA的表达（P < 0.05），且miR-200c作用更大；Western-blotting显示，miR-200c和miR-429极显著抑制SCD1蛋白质的表达（P < 0.01）；显微镜观察发现，miR-200c和miR-429抑制绵羊皮下脂肪细胞脂滴生成。由此证明，miR-200c和miR-429均靶向抑制SCD1基因的表达，进而抑制绵羊脂肪生成。