杂交石斑鱼干扰素调节因子3( IRF3 )基因的克隆及表达分析

干扰素调节因子家族(IRFs)具有抗病毒、免疫调节功能，干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3，IRF-3)是IRFs家族中的一员，也是免疫相关因子。为了解IRF3基因在杂交石斑鱼(Epinephelus. fuscoguttatus，♀)×清水石斑鱼(E. polyphekadion，♂)应对外源病毒刺激的免疫反应，利用cDNA末端快速扩充(Rapid-amplification of cDNA ends，RACE)技术克隆了杂交石斑鱼IRF3基因，该基因cDNA全长为2 529 bp，包含5'非编码区(5'-UTR)325 bp，3'非编码区(3'-UTR)916 bp，开放阅读框(Open reading frame，ORF)1 377 bp，可编码458个氨基酸。氨基酸序列包含N-末端DNA结合区(N-terminal DNA binding region，DBD)(1-108 aa)、1个C-末端干扰素相关区(C-terminal interferon related region，IAD)(255-435 aa)及色氨酸富含区(Tryptophan rich region，SRD)(440-450 aa)3个结构域。系统进化分析结果显示，杂交石斑鱼IRF3与花鲈(Lateolabrax maculatus)IRF3聚为一支，亲缘关系较近。利用实时荧光定量PCR检测IRF3基因在杂交石斑鱼肝、胃、鳃、肠和脾脏等9种组织表达情况，以及在外周血淋巴细胞(Peripheral blood lymphocytes，PBL)的时序性表达情况，结果显示，IRF3基因在9种组织中均有表达，肝、胃和肠中的表达量明显高于其他组织，头肾表达量最低。PBL在PolyI:C刺激1 h后IRF3基因表达量逐渐升高，4 h时表达量达到最大值(约为对照组的9.3倍)，8 h后逐渐下降。