P1-10 Thérapie génique et cellulaire et affections neurodégénératives

Introduction Les maladies a Prions sont caracterisees par une demence sub-aigue, une transmission inter-espece, une triade histopathologique (perte neuronale, vacuolisation, proliferation astrocytaire) et surtout par l’accumulation cerebrale d’une proteine prion anormale (PrPSc). Cette PrPSc resulte de la transconformation d’une proteine PrPc, codee par l’hote. Actuellement aucun traitement n’est disponible. La strategie que nous proposons est celle de la therapie cellulaire couplee a la therapie genique. Notre objectif est de realiser des greffes de cellules souches embryonnaires (ES) qui auront ete au prealable engagees dans la differenciation neurale et modifiees genetiquement de facon a exprimer des mutants PrP Dominants-Negatifs (PrP-DN : Q167R et Q218K), qui previennent et inhibent l’accumulation de la PrPSc. Ces mutants correspondent aux polymorphismes Q171R et E219K retrouves chez le mouton et l’homme respectivement. Afin de limiter le risque de tumeur intracerebrale de part l’utilisation d’ES, differents protocoles de differenciation neuronale sont compares. Materiels/Methodes Trois protocoles de differenciation neurale (Mc Kay, Smith, Benninger) sont compares d’un point de vue qualitatif et quantitatif. Des immunomarquages (nestin, Tuj1, GFAP, GFP) et des comptages cellulaires sont realises a differents stades de differenciation. Des greffes stereotaxiques au niveau de l’hippocampe, putamen et ventricule lateral de souris C57Bl/6 sont pratiques. En parallele, la transduction des ES et des precurseurs neuraux obtenus a ete mise au point avec les vecteurs lentiviraux derives du FIV et portant les mutants DN. Resultats La comparaison des 3 protocoles de differenciation sera detaillee au niveau des marquages en IF et des comptages cellulaires. Les resultats des premieres greffes intracerebrales issues de la comparaison des protocoles de differenciation chez les souris saines seront discutes. Conclusion Les premiers resultats de l’utilisation combinee de la therapie genique basee sur les Dominants-Negatifs et de la therapie cellulaire par greffes intracerebrales de cellules souches embryonnaires orientees vers la differenciation neuronale semblent prometteurs dans les affections a Prions.