PKC／Raf-1／NF—κB信号通路在低氧诱导大鼠单核细胞表达TNF-α中的作用

目的：研究PKC／Raf-1／NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠外周血单核细胞（PBMCs）肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达中的作用，探讨低氧与全身炎症反应综合征（SIRS）的关系，为进一步研究老年多器官功能障碍综合征（MODSE）的肺启动机制奠定基础。方法：采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞，分为chelerythrine＋低氧组、forskolin＋低氧组和单纯低氧组。Chelerythrine＋低氧组和forskolin＋低氧组细胞在低氧前分别予10μmol／L chelerythrine和50μmol／L forskolin预处理。然后各组均于低氧条件下（3％O2，5％CO2，92％N2）培养0、1、3、6、9、12、24h后，收集细胞及培养液上清，分别采用PKC、Raf活性检测试剂盒、电泳迁移分析法（EMSA）、逆转录PCR（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测PKC、Raf-1、NF-κB活性及TNF-α表达量。结果：低氧1-9h，PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性及TNF-α表达量显著高于正常对照组（P〈0．01）。低氧后1-24h，PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性与TNF-α mRNA和蛋白表达水平间呈显著正相关（P〈0．01，P〈0．05）。10μmol／L chelerythrine可显著抑制低氧诱导的PKC、Raf-1、NF-κB活性升高和TNF-α表达。50μmol／L forskolin可显著抑制低氧诱导的Raf-1、NF-κB活性升高及TNF-α表达。结论：低氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的PKC、Raf-1活性及NF-κB结合活性，并可诱导其产生大量的促炎症因子TNF-α，这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征（ARDS）时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关。