Cloning and sequence analysis of complete genome of hepatitis B virus isolates of genotypes B, C, D/C and A from Chinese patients with chronic hepatitis B

目的：扩增克隆乙型肝炎病毒（HBV）B,C,D/C及A基因型的全基因组,构建不同基因型的全基因序列克隆.方法：从中国慢性乙型肝炎患者血清提取DNA以L-PCR技术对3.2kb的HBVDNA进行扩增,纯化后克隆到TA载体.对于HBV不同基因型的全基因序列利用Simplot、DNAStar（ClustalW方法的MegAlign和Phylogenetictree）等生物软件进行分析.结果：克隆出我国主要存在的几种HBVDNA全基因序列：B、C、D/C和A基因型,包括：adr、adw、ayw血清型.B基因型（adw血清型）全基因序列长度为3215bp,C基因型（adrq＋血清型）为3215bp,D/C基因型（ayw2血清型）为3215bp,A基因型（adw血清型）为3182bp,均递交GenBank.在H3样品中的4个全基因克隆中存在一个同时含有2853-2885nt缺失突变和核心区的1762A-T、1764G-A双位点突变的变异株,表明同一个体中同时存在突变株和野生株,可能是耐抗病毒药物的分子基础. 结论：本研究克隆了我国有报道存在的主要基因型、血清型的HBV全基因序列,为全面了解我国HBV基因型和血清型提供了序列资料．