Preimplantation diagnosis of delta F508 mutation of mucoviscidosis in transgenic mice

Objectifs : Nous avons tente de maitriser la technique du diagnostic preimplantatoire chez la souris transgenique. Cette methode serait une alternative au diagnostic antenatal conventionnel. Methodes : Les embryons au stade de 4 ou 8 cellules ont ete recueillis chez des souris C57BL6xCBAF1, trois jours apres accouplement avec des souris C57BL6xSJLF1 transgeniques homozygotes du gene humain pour la mutation ΔF508. Apres micro-biopsie d'un blastomere, les embryons ont ete reimplantes chez des souris Swiss. La PCR (polymerase chain reaction) pour la mutation ΔF508 sur un seul blastomere a ete mise au point sur un appareil Perkin Elmer Cetus 9600 a l'aide d'une technique de double PCR. Resultats : La reussite de la biopsie a ete de 90,2 p. 100 sur 122 embryons au stade de 4 cellules, et de 93,8 p. 100 sur 128 embryons au stade de 8 cellules. Le taux d'eclosion in vitro a ete de 84,6 p. 100 sur 52 embryons apres la biopsie au stade de 4 cellules (controles 92,2 p. 100, p > 0,05), et de 90 p. 100 sur 50 embryons apres la biopsie au stade de 8 cellules (controles 94,4 p. 100, p > 0,05). Le taux de naissance, par rapport a embryon reimplante, pour 42 embryons apres biopsie au stade de 4 cellules a ete de 66,7 p. 100 (controles 72,5 p. 100, p > 0,05), et de 70,3 p. 100 pour 37 embryons apres biopsie au stade de 8 cellules (controles 71,9 p. 100, p > 0,05). Les souris nees d'embryons biopsies n'ont pas montre de difference par rapport aux controles, ni pour les poids de naissance, ni pour le poids des organes a 3 semaines. Sur 32 doubles PCR, pour la mutation ΔF508 (dont 20 sur un seul blastomere obtenu par la micro-biopsie et 12 de differents controles negatifs), nous avons obtenu 100 p. 100 de specificite et 100 p. 100 de sensibilite. Conclusion : La micro-biopsie des embryons au stade de 4 ou 8 cellules n'affecte pas la viabilite et le developpement ulterieur, et la double PCR pour la mutation ΔF508 sur un seul blastomere est fiable, dans nos conditions actuelles.