Padronização e implantação da técnica de antigenemia para monitorização da infecção pelo HHV-6 e HHV-7 e avaliação da co-infecção com HCMV no pós transplante hepático

O herpes virus humano HHV-6 e HHV-7 pertencem a subfamilia herpes virinae, familia herpes viridae, sao virus universais e apos infeccao primaria permanecem latentes no organismo, podendo ser reativados por periodo de imunossupressao. O objetivo da pesquisa visou a padronizacao e implantacao da antigenemia para diagnostico precoce de HHV-6 e HHV-7 e a realizacao da sorologia para HHV-6 em pacientes submetidos ao transplante de figado do Hospital das Clinicas da Unicamp. A partir dos dados obtidos da antigenemia para HHV-6 e HHV-7, avaliou com os achados de antigenemia do HCMV, N-PCR para HCMV, HHV-6, HHV-7 e outros aspectos clinico-laboratoriais. O protocolo foi seguido de acordo com os requerimentos para pesquisas e foi aprovado pelo Comite de Etica Institucional da Faculdade de Ciencias Medicas (FCM) da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp). Conseguiu-se para o estudo amostras de 32 pacientes, com idade mediana de 47 (18-66) anos, sendo 20 (62,5%) do sexo masculino e 12 (37,5%) do sexo feminino. A monitorizacao dos pacientes foi realizada prospectivamente desde o pre-transplante e no pos-transplante, de modo semanal no 1o e 2o, quinzenal no 3o mes e mensal do 4o mes ate o final do 6o mes. A partir de linfocitos extraidos de sangue periferico realizou-se a deteccao de antigenos de HHV-6 com anticorpos monoclonais C65206M (marca Biodesign International, France) e MAB8535 (marca Biodesign International - USA) e conjugados de soro de coelho anti-IgG de camundongo Z0412-1 (marca Dako - CA, USA) e soro de cabra anti-IgG de coelho marcado com peroxidase 81-6120 (marca Zymed, CA, USA). Para a deteccao de antigenos de HHV-7 foi utilizado o anticorpo monoclonal de rato KR4 (marca Advance Biotechnologies, Canada), conjugado soro de coelho anti-imunoglobulina de camundongo P0260 (marca Dako Cytomation, USA) e conjugado soro de cabra anti-IgG de coelho 81-6120 (marca Zymed, CA, USA) diluidos em PBS/BSA e aplicados sobre a fixacao celular. Foi realizado a deteccao de anticorpos IgM anti HHV-6 pelo teste de Elisa (marca Panbio, USA). Com essas metodologias a deteccao de IgM anti HHV-6 foi positiva em 15,6% dos pacientes no pre transplante, 25% na quarta semana, 40,6% na 12 semana e em 46,9% na 24 semana apos o enxerto. A antigenemia para HCMV, HHV-6 e HHV-7 foi positiva em 46,9%, 62,5% e 46,8% respectivamente. A N-PCR para HCMV e HHV-6 ocorreu em 81% dos casos, e para HHV-7 foi de 46,8%. Detectou-se que 50% dos pacientes estudados tiveram doenca por HCMV. A doenca causada pelo HHV-6 foi em 46,8% dos pacientes e em 15,6% para HHV-7. A concomitância de doencas foi observada nos pacientes com HCMV e HHV-6 em 21,9% e em 15,6% dos pacientes com HHV-6 e HHV-7. A doenca causada pelos beta herpes virus foi detectada com maior frequencia ao redor da quinta semana. E os episodios de doenca para HHV-6 e HHV-7 surgiram antes do aparecimento da doenca por HCMV. Este estudo confirma a relevância da infeccao pelo HCMV, HHV-6 e HHV-7 e a importância do monitoramento atraves de tecnicas para a deteccao precoce desses agentes, possibilitando a utilizacao de um tratamento preemptivo, com reducao do risco de doenca. Abstract