Cultivo in vitro con colágeno y fibroblastos humanos de un equivalente de mucosa oral de espesor total

espanolObjetivos. El presente trabajo tiene por objetivo obtener, mediante cultivo in vitro, laminas de tejido oral en las que se pueda identificar las estructuras de una mucosa oral completa. La aplicacion clinica del presente estudio permitiria, en determinados casos, la sustitucion del empleo de injertos libres de piel o autologos de mucosa oral por esta tecnica. Material y Metodo. A partir de pequenas biopsias de mucosa oral se hicieron cultivos primarios de queratinocitos. A partir de estos cultivos primarios se realizaron cultivos secundarios sobre una submucosa artificial constituida por colageno y fibroblastos humanos. Se analizaron histologicamente sus caracteristicas in vitro, y ulteriormente se procedio a la realizacion de injertos en ratones atimicos para conocer su comportamiento in vivo. Resultados. Los cultivos primarios fueron confluentes en un plazo minimo de 10 dias y maximo de 12 dias, periodo similar al observado para la confluencia de los cultivos secundarios. El tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la obtencion de una mucosa artificial completa oscilo entre los 20 y los 22 dias, mostrando las caracteristicas histologicas de una mucosa normal. Tras 17 dias de injerto en ratones inmunoincompetentes, sin ningun tipo de contingencia clinica,, la caracterizacion histologica e inmunohistoquimica (citoqueratinas 13 y 19, colageno IV y laminina) confirmo la similitud de la mucosa in vitro con la mucosa oral sana. Conclusion. Es posible mediante tecnicas de cultivo in vitro la obtencion de un equivalente de mucosa oral completa con colageno y fibroblastos. Si bien esta mucosa muestra un importante grado de retraccion, su manejo clinico es muy favorable. EnglishObjectives. The objective of this study was to obtain, by in vitro culture, sheets of oral tissue in which complete oral mucoso structures can be identified. Clinical application of the findings of this study will allow the replacement of free skin grafts or autologous oral mucosa grafts by this technique in certain cases. Material and Method. Primary keratinocyte cultures were prepared from small biopsy samples of oral mucosa. Secondary cultures were prepared from these primary cultures on an artificial submucosa constituted by collagen and human fibroblasts. The cell cultures were analyzed histologically in vitro and then used forgraft implants in athymic mice to study their behavior in vivo. Results. The primary cultures were confluent within a minimum period of 10 days and maximum of 12 days, which is similar to the period that the secondary cultures required to reach confluence. The time from sampling to achieving a complete artificial mucosa ranged from 2 to 22 days. The artificial mucosa showed histologic chorocteristics of a normal mucosa. After 77 days of grait implantation in immunoincompetent mice without any clinical contingency, histologic and immunohistochemical characterization (cytokeratins 19 and 13, collagen IV, and laminin) confirmed the similarity of the mucosa in vitro to healthy oral mucosa. Conclusion. A complete oral mucosa equivalent can be prepared with collagen and fibroblasts using in vitro culture techniques. Although this mucosa shows considerable retraction, its clinical handling is very favorable.