绿盲蝽水溶性海藻糖酶ALTre-1基因原核表达、 纯化与酶学特性

【目的】在前期克隆了绿盲蝽水溶性海藻糖酶（ALTre-1）基因的基础上，以获得具有酶活性的重组蛋白，明确酶促反应的最佳pH值及最适温度，为绿盲蝽海藻糖酶分子调控机制及其抑制剂的应用研究奠定基础。【方法】将含有绿盲蝽ALTre-1基因的T载体经NdeI和NotI双酶切，构建ALTre-1基因原核表达载体（pET28a-ALTre-1），表达载体经诱导表达和蛋白纯化，获得ALTre-1功能区纯化蛋白。在蛋白浓度为0．3mg·mL^-1的条件下，以海藻糖为底物，对纯化得到的重组Tre-1蛋白进行活性检测，确定其酶促反应的最佳pH值和最佳温度。【结果】ALTre-1基因在大肠杆菌中BL21中能够高效表达，纯化获得的重组蛋白在试验条件下有较高的海藻糖酶水解活性（（184．83土13．39）nmol·μg^-1．min^-1）。重组ALTre-1蛋白活性最适pH值为7．0（酶活性为（202．04士13．76）nmol·μg^-1,min^-1），表明重组ALTre-1蛋白是1个在中性环境中具有最佳活性的海藻糖酶，同时重组ALTre-1蛋白酶活性最适温度为55℃（酶活性为（228．59土4．62）nmo1·μg^-1.min^-1）。【结论】本研究克隆得到了ALTre-1全长基因，获得了具有海藻糖酶活的重组蛋白，该重组蛋白在pH7．0、温度55℃条件下酶活性最高。