PREPARATION AND BIOCOMPATIBILITY OF IN SITU CROSSLINKING HYALURONIC ACID HYDROGEL

目的: 制备原位交联透明质酸水凝胶，并初步评价其体外生物相容性。. 方法: 采用醇钠-酰氯法将丙烯酰氯与聚乙二醇反应，制得交联剂聚乙二醇二丙烯酸酯（polyethylene glycol acrylate，PEGDA）；采用傅里叶变换红外光谱仪和核磁共振光谱仪检测其分子结构。取透明质酸经化学修饰制备巯基化透明质酸（hyaluronic acid thiolation，HA-SH），采用Ellman法检测其巯基含量并计算巯基化产率。采用PBS将HA-SH和PEGDA分别配制成一定浓度（W/V）溶液，其中HA-SH浓度为0.5%、1.0%及1.5%，PEGDA为2%、4%及6%，按照不同比例混合，获得原位交联透明质酸水凝胶，记录交联反应时间。取1.5%HA-SH、4%PEGDA制备的原位交联透明质酸水凝胶，以浸提法检测其细胞毒性；然后接种人BMSCs并培养72?h，荧光显微镜下观察细胞形态及生长情况，并行活/死细胞染色观察，评价材料生物相容性。. 结果: 傅里叶变换红外光谱仪分析显示，PEGDA中大多数羟基被丙烯酸酯基取代；核磁共振光谱仪分析显示，PEGDA在5～7 ppm出现3组表征丙烯酸酯基的特征峰。HA-SH的巯基化产率为65.4%。2%～6%PEGDA与0.5%～1.5%HA-SH经不同比例混合后，交联反应在2～70?min内完成；不同浓度及比例交联形成的水凝胶均呈透明状。透明质酸水凝胶浸提液细胞毒性分级为1级，满足生物医用材料的要求。培养72 h后，BMSCs在透明质酸水凝胶中分布均匀、生长良好，活/死细胞染色显示以绿染活细胞为主。. 结论: 原位交联透明质酸水凝胶具有细胞毒性低、体外生物相容性好、交联时间可控的优点，有望成为组织工程种子细胞载体或组织缺损填充材料。.