Visualização in vivo de células mononucleares de medula óssea na microcirculação coronariana após isquemia miocárdica

A terapia celular para doencas cardiovasculares representa uma nova e promissora opcao terapeutica, principalmente para a cardiopatia isquemica. A injecao de celulas mononucleares de medula ossea (CMMO) pela via intracoronariana (ICO) e a mais estudada em ensaios clinicos. Embora ja se tenha documentado efeitos beneficos com essa terapia, dados relativos aos mecanismos de interacao entre as celulas transplantadas e o ambiente microvascular cardiaco sao escassos. A avaliacao das CMMO na microcirculacao miocardica tem o potencial de esclarecer seus mecanismos de acao, abrindo novas possibilidades terapeuticas. O objetivo do estudo foi descrever e avaliar uma inovadora tecnica de injecao ICO direta e visualizacao in vivo das CMMO na microcirculacao miocardica de pequenos roedores, apos um periodo de isquemia miocardica global (IMG) seguida de reperfusao, na presenca e na ausencia da aterosclerose. Materiais e Metodos: A tecnica de transplante cardiaco heterotopico cervical (TCHC) em murinos foi modificada com a insercao e fixacao de um microcateter conectado a uma seringa, no tronco braquiocefalico do animal doador. IMG foi induzida ocluindo-se a arteria nutridora do enxerto com um microclamp vascular, por 1 hora. As CMMO foram isoladas e marcadas antes da injecao ICO. Microscopia intravital de fluorescencia (MIF) foi usada para analise da microcirculacao coronariana do ventriculo direito (VD), incluindo arteriolas, capilares e venulas pos-capilares. Parâmetros de perfusao e permeabilidade microvasculares e as interacoes entre as CMMO e celulas endoteliais foram estudados. O impacto da aterosclerose na recuperacao, fenotipo e funcao celular tambem foi avaliado. Resultado: A MIF permitiu analise detalhada da microcirculacao coronariana e da cinetica das CMMO injetadas pela via ICO. A IMG afetou a microcirculacao, reduzindo a densidade capilar funcional (DCF). Tal reducao foi maior na presenca de aterosclerose... Cell therapy for cardiovascular disease represents a promising new therapeutic option, especially for ischemic heart disease. The intracoronary (ICo) injection of bone marow mononuclear cells (BMMC) is the most commonly studied rote in clinical trials. Although it has been documented beneficial effects with this therapy, data pertaining the mechanisms of interaction between transplanted cells and cardiac microvascular environment are lacking. Assessement of BMMC in myocardial microcirculation has the potential to clarify its mechanisms of action, opening new therapeutic possibilities. The objective of the study was to describe and to evaluate an innovative technique of direct ICo injection and in vivo visualization of BMMC in myocardial small rodents, after a period of global cardiac ischemia (GMI) and reperfusion, in the presence and absence of atherosclerosis. Materials and Methods: The syngeneic murine cervical heterotopic heart transplantation (CHHT) technique was modified by inserting and fixing a catheter connected to a syringe into the donor animal brachiocephalic trunk. GMI was induced occluding the nutritive artery of the graft for 1 hour. Bone marrow mononuclear cells were isolated and labeled prior to ICo injection. Intravital fluorescence microscopy (IFM) was used for analysis of the coronary microcirculation of the right ventricle (RV), including arterioles, capillaries and venules. Parameters of microvascular perfusion, microvascular permeability and the interactions between the BMMC and endothelial cells were studied. The impact of atherosclerosis on the recovery, phenotype and cellular function was also evaluated. Results: The IFM has allowed detailed analysis of both the coronary microcirculation, as the kinetics of BMMC. The GMI affected microcirculation, reducing the functional capillary density (FCD). This reduction was higher in the presence of atherosclerosis. The main area of cell retention was the capillary network...