Production et caractérisation d’Amb a 11 mature, un nouvel allergène majeur du pollen d’ambroisie (Ambrosia artemisiifolia) avec une activité cystéine protéase

Introduction Le pollen d’ambroisie ( Ambrosia artemisiifolia ) est une cause majeure d’allergies respiratoires severes en Amerique du Nord et en Europe. Recemment, nous avons identifie Amb a 11, un nouvel allergene majeur du pollen d’ambroisie de la famille des proteases a cysteines. L’objectif de la presente etude est la production et la caracterisation d’Amb a 11 mature produit sous une forme recombinante. Methodes La proteine Amb a 11 recombinante est obtenue par renaturation in vitro du zymogene a partir de corps d’inclusions d’ Escherichia coli , puis maturation a pH acide. Des experiences de mutagenese ont permis d’etudier le processus de maturation. Une caracterisation de la proteine mature a ete realisee par spectrometrie de masse et dichroisme circulaire et l’activite proteasique a ete mesuree par un test fluorimetrique. La reactivite IgE a ete analysee avec des patients allergiques a l’ambroisie. Resultats Le zymogene Amb a 11 renature peut-etre mature a pH acide par un mecanisme autocatalytique. L’analyse par spectrometrie de masse confirme l’elimination des deux propeptides N- et C-terminaux au cours de ce processus. Le spectre de dichroisme circulaire indique l’acquisition d’une structure secondaire similaire a celle d’Amb a 11 naturel. De meme que l’allergene naturel, Amb a 11 recombinant possede une forte activite cysteine protease et est reconnu par les IgE seriques de 60 % des patients allergiques au pollen d’ambroisie. Enfin, aucune reactivite croisee n’est observee avec la protease a cysteine allergenique Der p 1 de Dermatophagoides pteronyssinus . Conclusion Nous avons produit la proteine Amb a 11 recombinante, nouvel allergene majeur du pollen d’ambroisie, qui possede des caracteristiques structurales et fonctionnelles similaires a la molecule naturelle. Ces resultats ouvrent la voie a l’utilisation d’Amb a 11 pour le diagnostic et l’immunotherapie allergenique.