Aislamiento y propagación del virus de la hepatitis E en diferentes líneas celulares

Antecedentes: el virus de la hepatitis E es el agente causal de la hepatitis E. Las propiedades biologicas y moleculares de las cepas asiaticas del VHE ya han sido exploradas en cultivos celulares. Objetivos: aislar y propagar una cepa cubana del virus de la hepatitis E en diferentes lineas celulares. Metodos: la monocapa de las celulas A549 fue inoculada con una suspension de heces obtenida de un paciente con diagnostico serologico y molecular de hepatitis E. Estas celulas fueron observadas hasta el decimo pase. Mientras que, las lineas celulares MRC5, LLCMK2, HEP-2, FRhK4 y HeLa fueron utilizadas para propagar el virus de la hepatitis E, a partir del sobrenadante obtenido del tercer pase en A549. Estas celulas fueron seguidas hasta el tercer pase. El ARN y los antigenos de la cepa ECV/2349-03 fueron identificados por TR-RCP e inmunofluorescencia indirecta. Resultados: en las celulas A549 el ECP aparecio desde el primer pase, a los 3 d de posinoculacion. El genoma y los antigenos del virus fueron identificados en todos los pases seriados. En el resto de las lineas celulares estudiadas no se observo el ECP. En estas celulas el material genetico del virus de la hepatitis E se detecto desde el primer pase y los antigenos a partir del segundo pase, excepto en las HeLa. Conclusiones: estos resultados confirman que las celulas A549 pueden ser utilizadas para aislar y propagar el virus de la hepatitis E, mientras que las celulas MRC5, LLCMK2, HEP-2 y FRhK4 son capaces de mantener el crecimiento viral. Background: hepatitis E virus (HEV) is the causative agent of hepatitis E. Biological and molecular properties of Asian HEV strains have been explored in cells cultures. Objetives: the aim of this investigation was to isolate and propagate a Cuban HEV isolate in different cell lines. Methods: A549 cells monolayer was infected with faeces suspension from patient with sporadic hepatitis E and followed up until tenth passage. Lately, the supernatant harvested from third passage in A549 cells was inoculated in MRC5, HEP-2, LLCMK2, HeLa y FRhK4 for propagation study. These cells were observed up to third passage. RNA and viral antigen of ECV/2349-03 HEV strain were identified by RT-PCR and indirect immunofluorescence. Results: CPE appeared since first passage, at third day of post-inoculation in A549 cells. HEV antigens and genome were detected in all serial passages. CPE was not observed in the rest of cellular cultures. In the cells used for propagation the viral genome was observed from first passage, while the antigens were detected since second passage, except HeLa. Conclusions: these results confirm that A549 can be used to isolate and propagate HEV. Meanwhile, the MRC5, HEP-2, LLCMK2 and FRhK4 were able to support viral growing.